新冠病毒已蔓延至全球，研制新冠疫苗，廣泛接種疫苗可以快速建立免疫屏障。如圖1是利用新冠病毒包膜表面的S蛋白制備疫苗的相關(guān)過程，質(zhì)粒A上的m、n分別是啟動子和終止子，SUC2是標(biāo)記基因。如表1是5種限制酶及其識別序列，請回答問題：

（1）新冠病毒的基因是有遺傳效應(yīng)的

RNA

RNA

片段，為了使目的基因正常復(fù)制并成功導(dǎo)入質(zhì)粒，需要在PCR擴(kuò)增之前設(shè)計兩種引物分子，并在引物分子的

5′

5′

（填“5′”或“3′”）端添加合適的限制酶識別序列。引物的作用是

界定要擴(kuò)增的目的基因；是逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶的結(jié)合部位；是子鏈延伸的起點(diǎn)

界定要擴(kuò)增的目的基因；是逆轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶的結(jié)合部位；是子鏈延伸的起點(diǎn)

。
（2）圖1中②過程所使用的兩種限制酶是

NheⅠ、NcoⅠ

NheⅠ、NcoⅠ

，圖中目的基因表達(dá)的模板鏈?zhǔn)?

上鏈

上鏈

（填“上鏈”或“下鏈”），理由是

結(jié)合質(zhì)粒上限制酶酶切位點(diǎn)可知，目的基因的上鏈位于重組質(zhì)粒的內(nèi)側(cè)，下鏈位于外側(cè)，轉(zhuǎn)錄方向3′為m→n,且轉(zhuǎn)錄只能從模板鏈的3′端開始，因此上鏈?zhǔn)悄０彐?/div>

結(jié)合質(zhì)粒上限制酶酶切位點(diǎn)可知，目的基因的上鏈位于重組質(zhì)粒的內(nèi)側(cè)，下鏈位于外側(cè)，轉(zhuǎn)錄方向3′為m→n,且轉(zhuǎn)錄只能從模板鏈的3′端開始，因此上鏈?zhǔn)悄０彐?/div>。
（3）以RNA為模板，通過RT-PCR（反轉(zhuǎn)錄PCR）技術(shù)可獲取大量目的基因。進(jìn)行RT-PCR時，一般要加入4種脫氧核糖核苷三磷酸（dNTP）而不是脫氧核苷酸，原因是dNTP能為子鏈的延伸過程提供

能量和原料

能量和原料

，同時需加入的酶有

逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶

逆轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶

。
（4）PCR的產(chǎn)物一般通過電泳來鑒定，結(jié)果如圖2所示。1號泳道為標(biāo)準(zhǔn)（Marker），2號泳道為陽性對照（提純的S蛋白基因片段），3號泳道為實(shí)驗(yàn)組。標(biāo)準(zhǔn)（Marker）的實(shí)質(zhì)為

不同已知長度的DNA片段混合物

不同已知長度的DNA片段混合物

，陰性的樣本有時在3號泳道中也會出現(xiàn)假陽性的雜帶，其原因一般有

實(shí)驗(yàn)的模板受到污染、引物的特異性不強(qiáng)、退火溫度偏低等

實(shí)驗(yàn)的模板受到污染、引物的特異性不強(qiáng)、退火溫度偏低等

（至少答出兩點(diǎn)）。
（5）DNA和mRNA也能夠成為疫苗。在兩者中，

mRNA疫苗

mRNA疫苗

的安全性更有優(yōu)勢，因?yàn)樗梢员徽＜?xì)胞降解，不會整合到人體細(xì)胞的基因組中造成難以預(yù)料的結(jié)果而備受人們青睞；另外，它的研發(fā)周期較短，對快速應(yīng)對大規(guī)模爆發(fā)性傳染疾病具有重要的意義。