回答與基因工程和植物克隆有關(guān)的問(wèn)題:
科研工作者將TaNHX2基因轉(zhuǎn)移到某植物細(xì)胞內(nèi),獲得了轉(zhuǎn)基因耐鹽植株新品種。如圖是獲取的含有目的基因的DNA片段,Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamhⅠ三種限制性核酸內(nèi)切酶的識(shí)別序列分別是↓GATC、G↓AATTC、G↓GATCC,質(zhì)粒上各有一個(gè)Sau3AⅠ和ECoRⅠ的酶切位點(diǎn)。請(qǐng)分析回答問(wèn)題:
(1)若用BamHⅠ切割圖中所示的DNA片段獲得了目的基因,則需選用
Sau3AI
Sau3AI
酶切割質(zhì)粒,以便構(gòu)建重組質(zhì)粒,該方案的缺陷是會(huì)出現(xiàn)目的基因和質(zhì)粒的自我環(huán)化以及目的基因在質(zhì)粒上的連接方向不確定
目的基因在質(zhì)粒上的連接方向不確定
。故切割圖中所示DNA片段的最佳方案是選用EcoRI和BamHI
EcoRI和BamHI
酶。實(shí)驗(yàn)中酶作用的強(qiáng)弱可用酶活性
酶活性
表示。
(2)將獲得的重組質(zhì)粒導(dǎo)入原生質(zhì)體,導(dǎo)入方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和顯微注射法
顯微注射法
。原生質(zhì)體培養(yǎng)液中需要加入適宜濃度的甘露醇,其作用是維持一定的滲透壓,保持原生質(zhì)體的形態(tài)
維持一定的滲透壓,保持原生質(zhì)體的形態(tài)
。原生質(zhì)體經(jīng)過(guò)細(xì)胞壁再生,進(jìn)而分裂和脫分化形成愈傷組織
愈傷組織
。
(3)為了從個(gè)體水平檢測(cè)成果,需要進(jìn)行的操作是將轉(zhuǎn)基因植株種植在鹽堿地,觀察其生長(zhǎng)狀況
將轉(zhuǎn)基因植株種植在鹽堿地,觀察其生長(zhǎng)狀況
。