近年來(lái),科學(xué)家們陸續(xù)在動(dòng)物、植物、真菌和細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)了朊病毒。2019年1月,《自然--通訊》雜志發(fā)表了來(lái)自我國(guó)科學(xué)家許曉東等人的研究成果,他們對(duì)一種桿狀病毒的晚期表達(dá)因子LEF-10蛋白進(jìn)行了研究,確定其為由病毒編碼的朊病毒,此項(xiàng)研究將朊病毒存在的范圍拓展至病毒界。至此,“朊病毒廣泛存在”終于得到了證實(shí)。
(1)對(duì)LEF-10蛋白進(jìn)行分離、純化和鑒定,需采用凝膠色譜法凝膠色譜法及電泳技術(shù)。前者是利用相對(duì)分子質(zhì)量大小分離蛋白質(zhì),而電泳是利用了待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身大小和形狀等分子本身大小和形狀等(答兩點(diǎn))的不同,使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速率,從而分離樣品的過(guò)程。對(duì)已純化的蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定時(shí),通常采用 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳,根據(jù)如圖3所示的電泳結(jié)果,某同學(xué)得出“該蛋白質(zhì)分子具有兩條鏈”的結(jié)論。你認(rèn)為這種說(shuō)法可靠嗎?請(qǐng)說(shuō)明理由:不可靠,該結(jié)果只能說(shuō)明有兩種相對(duì)分子質(zhì)量不同的肽鏈,不知道有幾條不可靠,該結(jié)果只能說(shuō)明有兩種相對(duì)分子質(zhì)量不同的肽鏈,不知道有幾條。
(2)利用某酵母菌株進(jìn)行實(shí)驗(yàn),以確定 LEF-10蛋白是否能表現(xiàn)出朊病毒特性。已知酵母細(xì)胞中的Sup35蛋白受到一定刺激后可能會(huì)發(fā)生空間結(jié)構(gòu)改變,變成朊病毒,Sup35蛋白以及“朊病毒化”后的Sup35蛋白對(duì)酵母細(xì)胞代謝過(guò)程影響如圖1,部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2。
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現(xiàn)利用LEF-10蛋白基因替代Sup35蛋白基因的部分序列(即決定 Sup35 蛋白朊病毒化的DNA 片段),新表達(dá)出的蛋白具備Sup35控制代謝的功能以及LEF-10的特性,培養(yǎng)觀察酵母菌落特征。對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿的滅菌方式分別為高壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽滅菌法和干熱滅菌法干熱滅菌法。滅菌后的培養(yǎng)基需冷卻至5050℃左右時(shí)倒平板,原因是:溫度過(guò)高不便于用手操作,溫度過(guò)低培養(yǎng)基將發(fā)生凝固溫度過(guò)高不便于用手操作,溫度過(guò)低培養(yǎng)基將發(fā)生凝固。培養(yǎng)結(jié)果出現(xiàn)白色白色菌落即可作為L(zhǎng)EF-10蛋白可以表現(xiàn)出朊病毒特性的證據(jù)。
【答案】凝膠色譜法;分子本身大小和形狀等;不可靠,該結(jié)果只能說(shuō)明有兩種相對(duì)分子質(zhì)量不同的肽鏈,不知道有幾條;高壓蒸汽滅菌法;干熱滅菌法;50;溫度過(guò)高不便于用手操作,溫度過(guò)低培養(yǎng)基將發(fā)生凝固;白色
【解答】
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