營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株是指野生型菌株經(jīng)過(guò)人工誘變或自然突變失去合成某種營(yíng)養(yǎng)的能力，只有在基本培養(yǎng)基中補(bǔ)充所缺乏的營(yíng)養(yǎng)因子后才能生長(zhǎng)的菌株，包括氨基酸缺陷型菌株、維生素缺陷型菌株和堿基缺陷型菌株等。篩選營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株的常規(guī)步驟為：誘變育種→淘汰野生型→檢出缺陷型→鑒定缺陷型。
（1）用紫外線誘變大腸桿菌，誘變后常采用選擇培養(yǎng)基淘汰野生型大腸桿菌，使?fàn)I養(yǎng)缺陷型大腸桿菌得以富集。培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至
中性或弱堿
中性或弱堿
性，再在壓力和溫度分別為 100kPa,121℃
100kPa,121℃
的條件下進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。
（2）夾層平板培養(yǎng)法可用于營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株的檢出，其原理如圖1所示，先在培養(yǎng)皿上倒一薄層基本培養(yǎng)基，凝固后再接種一層誘變處理的菌液，其上再澆一層基本培養(yǎng)基，凝固后放入 恒溫培養(yǎng)箱
恒溫培養(yǎng)箱
中培養(yǎng)出菌落，再倒一層完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。若結(jié)果如圖2所示，其中菌落 B
B
（填“A”或“B”）即為檢出的營(yíng)養(yǎng)缺陷型大腸桿菌菌株。
（3）研究小組一利用生長(zhǎng)圖譜法初步確定檢出的營(yíng)養(yǎng)缺陷型大腸桿菌的類型，即在基本培養(yǎng)基乙的A～E這5個(gè)區(qū)域中分別添加不同的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，然后用 稀釋涂布平板法
稀釋涂布平板法
法將檢出的營(yíng)養(yǎng)缺陷型大腸桿菌接種在圖3培養(yǎng)基上，若培養(yǎng)一段時(shí)間后在圖3的BC交界處長(zhǎng)出了菌落，則說(shuō)明該菌株是 ab
ab
。
a.氨基酸缺陷型菌株
b.維生素缺陷型菌株
c.堿基缺陷型菌株
（4）研究小組二用上述方法鑒定了某菌株屬于維生素營(yíng)養(yǎng)缺陷型，為了進(jìn)一步確定該菌株的具體類型，他們把15種維生素按照不同組合分為5個(gè)小組，用5個(gè)濾紙片分別蘸取不同小組的維生素，然后覆于接種后的瓊脂平板上培養(yǎng)一段時(shí)間。
| 組別 |
維生素組合 |
| 1 |
維生素A |
維生素B1 |
維生素B2 |
維生素B6 |
維生素B12 |
| 2 |
維生素C |
維生素B1 |
維生素D2 |
維生素E |
煙酰胺 |
| 3 |
葉酸 |
維生素B2 |
維生素D2 |
膽堿 |
泛酸鈣 |
| 4 |
對(duì)氨基苯甲酸 |
維生素B6 |
維生素E |
膽堿 |
肌醇 |
| 5 |
生物素 |
維生素12 |
煙酰胺 |
泛酸鈣 |
肌醇 |
若觀察到1組和2組濾紙片周圍產(chǎn)生生長(zhǎng)圈（圖4），則該營(yíng)養(yǎng)缺陷型大腸桿菌不能合成的維生素是
維生素B1
維生素B1
；若菌株為葉酸和生物素的雙營(yíng)養(yǎng)缺陷型大腸桿菌，則其在圖4培養(yǎng)基上形成菌落的位置是
3與5的交界處
3與5的交界處
。
