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基因定點整合可替換特定基因，該技術(shù)可用于單基因遺傳病的治療。苯丙酮尿癥是由PKU基因突變引起的，將正常PKU基因定點整合到PKU基因突變的小鼠胚胎干細胞的染色體DNA上，替換突變基因，可用來研究該病的基因治療過程。定點整合的過程是：從染色體DNA上突變PKU基因兩側(cè)各選擇一段DNA序列HB1和HB2，根據(jù)其堿基序列分別合成HB1和HB2，再將兩者分別與基因HSV-tkl、HSV-tk2連接，中間插入正常PKU基因和標記基因neor，構(gòu)建出如圖所示的重組載體。重組載體和染色體DNA中的HB1和HB2序列發(fā)生交換，導致兩者之間區(qū)域發(fā)生互換，如圖所示。
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（1）構(gòu)建重組載體時，常用的工具酶有
限制酶、DNA連接酶
限制酶、DNA連接酶
。該實驗用小鼠胚胎干細胞作為PKU基因的受體細胞以培育出轉(zhuǎn)基因小鼠，除了胚胎干細胞能大量增殖外，還因為胚胎干細胞
具有發(fā)育的全能性
具有發(fā)育的全能性
。
（2）為獲得小鼠的胚胎干細胞，可將小鼠囊胚中的
內(nèi)細胞團
內(nèi)細胞團
取出，并用
胰蛋白酶或膠原蛋白酶
胰蛋白酶或膠原蛋白酶
處理使其分散成單個細胞進行培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中大部分細胞會貼附在培養(yǎng)瓶的表面生長，這種現(xiàn)象稱為
貼壁生長
貼壁生長
。
（3）用圖中重組載體轉(zhuǎn)化胚胎干細胞時，會出現(xiàn)PKU基因錯誤整合。錯誤整合時，載體的兩個HSV-tk中至少會有一個與neor一起整合到染色體DNA上。已知含有neor的細胞具有G418的抗性。HSV-tkl、HSV-tk2的產(chǎn)物都能把DHPG轉(zhuǎn)化成有毒物質(zhì)而使細胞死亡。轉(zhuǎn)化后的胚胎干細胞依次在含有G418及同時含有G418和DHPG的培養(yǎng)液中進行培養(yǎng)，在雙重選擇下存活下來的是
正確整合（含neor而不含HSV-tk ）
正確整合（含neor而不含HSV-tk ）
的胚胎干細胞，理由是
能在含有G418的培養(yǎng)液存活說明轉(zhuǎn)化后的胚胎干細胞中含neor，能在含DHPG的培養(yǎng)液中存活說明轉(zhuǎn)化后的胚胎干細胞中不含HSV-tk
能在含有G418的培養(yǎng)液存活說明轉(zhuǎn)化后的胚胎干細胞中含neor，能在含DHPG的培養(yǎng)液中存活說明轉(zhuǎn)化后的胚胎干細胞中不含HSV-tk
。
（4）將篩選得到的胚胎干細胞培育成小鼠，從個體生物學水平檢測，若小鼠
尿液中不含大量苯丙酮酸
尿液中不含大量苯丙酮酸
，說明PKU基因成功表達。

【答案】限制酶、DNA連接酶；具有發(fā)育的全能性；內(nèi)細胞團；胰蛋白酶或膠原蛋白酶；貼壁生長；正確整合（含neor而不含HSV-tk ）；能在含有G418的培養(yǎng)液存活說明轉(zhuǎn)化后的胚胎干細胞中含neor，能在含DHPG的培養(yǎng)液中存活說明轉(zhuǎn)化后的胚胎干細胞中不含HSV-tk；尿液中不含大量苯丙酮酸
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：86引用：6難度：0.6
相似題

  • 1．科研小組利用基因工程技術(shù)將“抗蟲基因”轉(zhuǎn)入棉花細胞成功培育出抗蟲棉，該技術(shù)所用的含“抗蟲基因”的DNA與質(zhì)粒上相關(guān)限制酶的酶切位點分別如圖1、圖2所示（不同限制酶的識別序列和酶切位點：BamHⅠ5′-G↓GATCC-3′，BclⅠ5′-T↓GATCA-3′，Sau3AⅠ5′-↓GATC-3′，HindⅢ5′-A↓AGCTT-3′）。請分析并回答以下問題：
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    （1）將抗蟲基因轉(zhuǎn)入棉花細胞前，可以通過PCR擴增獲得大量抗蟲基因，PCR擴增前應(yīng)根據(jù)
     
    設(shè)計引物。培育轉(zhuǎn)基因棉花的核心工作是
     
    。由圖1和圖2分析可知，研究人員應(yīng)選擇
     
    限制酶處理含抗蟲基因的DNA片段，在處理質(zhì)粒的時候應(yīng)選擇
     
    限制酶。
    （2）蛋白酶抑制劑基因也是一種抗蟲基因，某研究團隊將胰蛋白酶抑制劑（NaPI）和胰凝乳蛋白酶抑制劑（StPin1A）的基因單獨或共同轉(zhuǎn)化，獲得轉(zhuǎn)基因植株。
    ①將抗蟲基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)時，除了采用我國科學家獨創(chuàng)的花粉管通道法，還可以采用
     
    法，使用該方法時，應(yīng)將抗蟲基因插入到質(zhì)粒的
     
    區(qū)域。
    ②標記基因可用于檢測目的基因是否導入，由圖2可知，應(yīng)選含有
     
    的培養(yǎng)基篩選含有重組質(zhì)粒的細胞。為了檢測目的基因在受體細胞中是否穩(wěn)定表達，在分子水平上的檢測方法為
     
    。
    ③圖3為將胰蛋白酶抑制劑（NaPI）和胰凝乳蛋白酶抑制劑（StPin1A）的基因單獨或共同轉(zhuǎn)化的實驗結(jié)果，據(jù)結(jié)果分析，
     
    （選填“NaPI”或“StpinlA”或“NaPI+StpinlA”）轉(zhuǎn)基因棉花的抗蟲效果最佳，得出該結(jié)論的原因是
     
    。

    發(fā)布：2024/11/19 5:30:2組卷：38引用：2難度：0.5

  • 2．某科研小組從土壤菌株A、B中分離到同源性為93%的Bt1抗蟲基因和Bt2抗蟲基因的編碼序列，并運用交錯延伸PCR技術(shù)獲得了抗蟲性能強的重組B基因，轉(zhuǎn)入煙草獲得成功，過程如圖所示。下列選項正確的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)
    注：①交錯延伸PCR：基因Bt1和Bt2均作為模板，所需引物相同，圖中僅示其中一條鏈的延伸情況。②啟動子Pr1a可在煙草葉肉細胞中特異性啟動基因的轉(zhuǎn)錄。③圖中生長素合成酶基因是通過成熟mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得的DNA片段，可使植物細胞合成生長素。

    發(fā)布：2024/11/16 21:0:1組卷：36引用：2難度：0.5

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    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7
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