基因X的表達產(chǎn)物可保護損傷的神經(jīng)細胞。科學(xué)家構(gòu)建了含X的基因表達載體(圖1),并導(dǎo)入到大鼠神經(jīng)干細胞中,用于干細胞基因治療的研究。請據(jù)此回答下列問題:
(1)構(gòu)建含X的基因表達載體時,應(yīng)選擇圖1中的BamHⅠBamHⅠ限制酶。
(2)酶切后的載體和基因X進行連接,可產(chǎn)生3種連接產(chǎn)物:單個載體自連,基因X與載體正向連接、基因X與載體反向連接(如圖1所示)。為鑒定這3種產(chǎn)物,選擇EcoRI酶和HindHⅢ酶對篩選得到的載體進行雙酶切,并對酶切后的DNA片段進行電泳分析,結(jié)果如圖2所示。圖中1、2、3泳道分別對應(yīng)的載體的連接方式是載體自連載體自連、反向連接反向連接、正向連接正向連接。
(3)在培養(yǎng)大鼠神經(jīng)干細胞的過程中,可使用胰蛋白酶或膠原蛋白胰蛋白酶或膠原蛋白酶將細胞分散開。分散的細胞很快就貼附在瓶壁上,稱為細胞貼壁細胞貼壁。
(4)將正向連接的重組載體導(dǎo)入神經(jīng)干細胞后,為了檢測基因X是否轉(zhuǎn)錄出mRNA,可用分子雜交分子雜交技術(shù)。當(dāng)培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞達到一定密度時,需進行傳代傳代培養(yǎng)以得到更多數(shù)量的細胞,用于神經(jīng)干細胞移植治療實驗。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】BamHⅠ;載體自連;反向連接;正向連接;胰蛋白酶或膠原蛋白;細胞貼壁;分子雜交;傳代
【解答】
【點評】
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