塑料制品方便人們生活的同時(shí)，也造成了短時(shí)期難以降解的“白色污染”。研究人員欲比較腸桿菌YT1和芽孢桿菌YP1兩類(lèi)細(xì)菌降解塑料（主要成分為聚氯乙烯（PVC）、聚乙烯（PE）和聚丙烯（PP）等，兩類(lèi)細(xì)菌主要降解PE）的能力，并通過(guò)基因工程拼接黃粉蟲(chóng)腸道內(nèi)菌株WZ的降解PVC的胞外酶基因CD3D，培育降解塑料的“超級(jí)菌”。
（1）菌株的篩選。配制固體培養(yǎng)基，接種菌株后表層覆蓋0.1mm厚度的PE塑料。分組實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖所示：
| 培養(yǎng)基及接種菌株 |
培養(yǎng)基1 |
培養(yǎng)基2 |
培養(yǎng)基3 |
| 單獨(dú)培養(yǎng)并接種YT1 |
單獨(dú)培養(yǎng)并接種YP1 |
混合培養(yǎng)YT1和YP1后，選取YP1接種 |
| 降解圈（直徑D/mm） |
3.5 |
1.8 |
4.2 |
①在篩選分解PE塑料能力大小的菌株時(shí)，應(yīng)將兩類(lèi)菌株接種到以
PE塑料
PE塑料
為唯一碳源的培養(yǎng)基，從功能上講，該培養(yǎng)基屬于
選擇培養(yǎng)基
選擇培養(yǎng)基
。
②篩選分解PE塑料能力強(qiáng)的菌株不能直接以降解圈的大小為指標(biāo)，其原因是
因?yàn)榫w繁殖力不同，形成的菌落大小不同
因?yàn)榫w繁殖力不同，形成的菌落大小不同
。培養(yǎng)基3中接種混合培養(yǎng)后的YP1，其降解圈直徑明顯加大，其原因可能是
YP1和YT1混合培養(yǎng)過(guò)程中，YP1菌株整合了YT1的對(duì)PE塑料高分解力的基因，發(fā)生了轉(zhuǎn)化
YP1和YT1混合培養(yǎng)過(guò)程中，YP1菌株整合了YT1的對(duì)PE塑料高分解力的基因，發(fā)生了轉(zhuǎn)化
。
（2）培育“超級(jí)菌”。對(duì)菌株WZ改造后的CD3D基因進(jìn)行研究，把CD3D基因和His標(biāo)簽基因（His標(biāo)簽由6個(gè)組氨酸組成）連接起來(lái)構(gòu)建融合基因，并構(gòu)建重組基因表達(dá)載體，如圖為載體、CD3D基因的結(jié)構(gòu)、不同限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)，欲將標(biāo)簽基因連接在CD3D基因編碼區(qū)的末端，已知組氨酸的密碼子為CAU，終止密碼子為UAG。
限制酶識(shí)別序列及切割位點(diǎn)：MunⅠ：CAATTG、XhoⅠ：CTCGAG、BcoRⅠ：G↓AATTC、SalⅠ：G↓TCGAC
①寫(xiě)出His的基因編碼鏈的堿基序列5′
CATCATCATCATCATCATTAG
CATCATCATCATCATCATTAG
3′。
②為構(gòu)建融合基因并將其插入載體，科研人員設(shè)計(jì)了一對(duì)與CD3D基因編碼區(qū)兩端序列互補(bǔ)配對(duì)的引物，設(shè)計(jì)時(shí)需在引物
B
B
（填“A”或“B”）的5′端增加相應(yīng)的限制酶識(shí)別序列和His基因的編碼序列，請(qǐng)寫(xiě)出該引物開(kāi)頭的12個(gè)堿基序列：5′
CTCGAGCTAATG
CTCGAGCTAATG
3′。
