研究人員利用綠色熒光蛋白基因（sGFP）轉(zhuǎn)染大麗輪枝菌，培育表達(dá)綠色熒光蛋白的轉(zhuǎn)基因菌株。主要過(guò)程如下（圖中a鏈和b鏈分別是相應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈）。
回答下列問(wèn)題：

（1）第①步：PCR擴(kuò)增sGFP基因。PCR擴(kuò)增sGFP的原理是

DNA雙鏈復(fù)制

DNA雙鏈復(fù)制

；圖中b鏈的堿基序列黏性末端為

AGCT

AGCT

。
（2）第②步：目的基因與運(yùn)載體結(jié)合。②需要的工具酶是

DNA連接酶

DNA連接酶

，此時(shí)目的基因插入到

構(gòu)巢曲霉

構(gòu)巢曲霉

啟動(dòng)子之后，目的是

保證sGFP基因可以在大麗輪枝菌細(xì)胞中表達(dá)

保證sGFP基因可以在大麗輪枝菌細(xì)胞中表達(dá)

。
（3）第③步：目的基因?qū)氪篼愝喼?。該過(guò)程需要先將目的基因?qū)朕r(nóng)桿菌，而后將轉(zhuǎn)化后的農(nóng)桿菌放置于含有的

潮霉素

潮霉素

培養(yǎng)基上，篩選出含有目的基因的農(nóng)桿菌。將導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌加入大麗輪枝菌的孢子細(xì)胞懸液中，在適宜條件下完成轉(zhuǎn)染后利用濾膜過(guò)濾得到孢子細(xì)胞，再在真菌培養(yǎng)基上培養(yǎng)獲得菌落，最終通過(guò)檢測(cè)

熒光強(qiáng)度

熒光強(qiáng)度

篩選出綠色熒光蛋白旺盛表達(dá)的大麗輪枝菌。