新冠病毒S蛋白與其侵染宿主細(xì)胞密切相關(guān)，疫苗的研究與生產(chǎn)有多種途徑，回答以下問題。
（1）我國目前已上市的滅活新冠疫苗，是利用Vero細(xì)胞（非洲綠猴的腎臟上皮細(xì)胞）對病毒進行增殖后滅活，因此需對Vero細(xì)胞進行大量培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)時需利用胰蛋白酶使細(xì)胞分散開并制成

細(xì)胞懸浮液

細(xì)胞懸浮液

。對病毒非滅活是指利用物理或化學(xué)手段使病原體失去感染能力，但保留原來的

抗原

抗原

結(jié)構(gòu)。
（2）S蛋白的RBD多肽區(qū)域是新冠病毒感染宿主細(xì)胞的關(guān)鍵。研究人員現(xiàn)利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)S蛋白的RBD多肽片段制作重組蛋白疫苗?；具^程如圖所示：

（注：LacZ基因可使細(xì)菌利用加入培養(yǎng)基的物質(zhì)X-gal,從而使菌落顯現(xiàn)出藍(lán)色。若無該基因或該基因被破壞，則菌落成白色。）
①提取新冠病毒RNA經(jīng)過

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

得到的cDNA，經(jīng)

PCR

PCR

技術(shù)擴增得到RBD基因，與克隆質(zhì)粒pUC質(zhì)粒連接，并接種到添加

氨芐青霉素和X-gal

氨芐青霉素和X-gal

的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，一段時間后，挑選顏色為

白色

白色

的菌落用液體培養(yǎng)基擴大培養(yǎng)，提取重組質(zhì)粒pUC-RBD。
②接下來應(yīng)用限制酶對pUC-RBD進行酶切獲得RBD基因，并與BamHI酶和XhoI酶切后的載體pET質(zhì)粒連接。但RBD基因序列兩端無相應(yīng)限制酶酶切位點，現(xiàn)欲利用RCR技術(shù)對RBD基因進行擴增同時在其上下游區(qū)域增補上相應(yīng)限制酶的識別序列，則根據(jù)如表，PCR時所用的上下游引物應(yīng)分別添加的序列是

5’-GGATCC-3’和5’CTCGAG-3’

5’-GGATCC-3’和5’CTCGAG-3’

。

限制酶	BamHⅠ	HindⅢ	XhoⅠ	XbaⅠ
識別序列	5′-GGATCC-3′	5′-AAGCTT-3′	5′-CTCGAG-3′	5′-TCTAGA-3′

③構(gòu)建好的基因表達(dá)載體再次導(dǎo)入大腸桿菌培養(yǎng)，要檢測最終是否表達(dá)了S蛋白的RBD區(qū)域，可以加入

RBD抗體

RBD抗體

進行檢測。
（3）有研究表明，現(xiàn)有的疫苗對新出現(xiàn)的變異類型病毒仍具有預(yù)防效果，原因是

與原有新冠病毒的抗原結(jié)構(gòu)相似

與原有新冠病毒的抗原結(jié)構(gòu)相似

。