匙葉草是一種泌鹽植物??蒲泄ぷ髡邔⒊兹~草液泡膜Na+/H+逆向轉運蛋白基因(TaNHX2基因)轉移到棉花細胞內,獲得了轉基因耐鹽棉花新品種。圖1是獲取的含有目的基因的DNA片段,Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ為三種限制酶,圖中箭頭所指為三種限制酶的切點;圖2是三種限制酶的識別序列與酶切位點示意圖;圖3是土壤農桿菌中用于攜帶目的基因的Ti質粒結構示意圖。請分析回答問題:
(1)若圖1所示DNA片段是利用匙葉草的DNA直接獲得的,則該獲取目的基因的方法為
從基因文庫中獲取
從基因文庫中獲取
。
(2)不能在匙葉草根尖分生區(qū)細胞中獲得TaNHX2基因的mRNA,其原因是匙葉草根尖分生區(qū)細胞中的TaNHX2基因不表達
匙葉草根尖分生區(qū)細胞中的TaNHX2基因不表達
。
(3)若用BamHⅠ切割圖1所示的DNA片段,獲得目的基因,則需選用Sau3AⅠ
Sau3AⅠ
切割圖3所示質粒,以便構建基因表達載體,該方案的缺陷是會出現(xiàn)目的基因和質粒的自我環(huán)化、目的基因在質粒上的連接方向不確定
會出現(xiàn)目的基因和質粒的自我環(huán)化、目的基因在質粒上的連接方向不確定
(答出兩點)。為了避免上述缺陷,切割圖1所示DNA片段的最佳方案是選用酶EcoRⅠ和BamHⅠ
EcoRⅠ和BamHⅠ
,切割圖3所示質粒的方案是選用酶EcoRⅠ和Sau3AⅠ
EcoRⅠ和Sau3AⅠ
。
(4)用上述最佳方案構建基因表達載體,所得重組質粒不一定能
不一定能
(填“能”、“不能”或“不一定能”)被BamHⅠ切割。
(5)圖3中,質粒上的抗生素抗性基因的作用是篩選出含有目的基因的受體細胞
篩選出含有目的基因的受體細胞
。