研究人員從土壤中分離獲得能分解纖維素的細菌A菌），從A菌中提取一種纖維素酶基因（CBHI，長度為1.4kbp）并進行PCR擴增，然后與高效表達載體pUT質(zhì)粒（長度為11．bp）連接構(gòu)建成重組質(zhì)粒并導入A菌，從而獲得分解纖維素能力更強的工程菌（B菌）。
| 限制酶 | 識別序列及酶切位點 |
| BglⅡ | A↓GATCT |
| BstEⅡ | G↓GTAACC |
| SacⅠ | G↓AGCTC |
| MspⅠ | G↓CGG |
| BamHⅠ | G↓GATCC |
（1）CBHⅡ基因兩端需添加相關(guān)酶切位點才能與pUT質(zhì)連接，因此在擴增CBHⅡ基因時，需要在兩種引物上分別添加
AGATCT
AGATCT
序列和 GGTAACC
GGTAACC
序列。PCR中需要添加引物的原因是 使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸
使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸
。（2）為鑒定重組質(zhì)粒是否構(gòu)建成功，將重組質(zhì)粒導入A菌，并將其接種在含
抗生素N
抗生素N
的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，然后提取3個不同菌落的質(zhì)粒分別進行雙酶切驗證將酶切片段和CHⅡ基因分別進行電泳，結(jié)果如圖2所示。據(jù)此分析，菌落 2、3
2、3
中成功導入了重組質(zhì)粒。完整的重組質(zhì)粒應包括 啟動子、終止子、目的基因、標記基因、復制原點
啟動子、終止子、目的基因、標記基因、復制原點
（至少答出三點）。
（3）圖3中B鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，轉(zhuǎn)錄時mRNA自身的延伸方向為5′→3′。為了使CBHⅡ基因按照正確的方向與已被酶切的pUT質(zhì)粒連接，圖中酶切位點1和酶切位點2所對應的酶分別是
BglⅡ和 BstEⅡ
BglⅡ和 BstEⅡ
，用兩種限制酶切割的目的是 防止發(fā)生自身環(huán)化，保證 CBHⅡ基因和pUT 質(zhì)粒正確連接
防止發(fā)生自身環(huán)化，保證 CBHⅡ基因和pUT 質(zhì)粒正確連接
。（4）為檢測B菌的纖維素分解能力，將含有20%纖維素的培養(yǎng)基分為三組，一組接種B菌，一組不做處理，一組接種
A菌
A菌
，在相同條件下培養(yǎng)一段時間，測定培養(yǎng)基中纖維素含量，結(jié)果如圖4所示，說明 B菌分解纖維素能力比A菌更強
B菌分解纖維素能力比A菌更強
。預期該工程菌在處理廢棄物及保護環(huán)境方面可能的應用，舉一個實例。 降解秸稈，減少秸稈燃燒帶來的空氣污染
降解秸稈，減少秸稈燃燒帶來的空氣污染
。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】AGATCT；GGTAACC；使DNA聚合酶能夠從引物的3’端開始連接脫氧核苷酸；抗生素N；2、3；啟動子、終止子、目的基因、標記基因、復制原點；BglⅡ和 BstEⅡ；防止發(fā)生自身環(huán)化，保證 CBHⅡ基因和pUT 質(zhì)粒正確連接；A菌；B菌分解纖維素能力比A菌更強；降解秸稈，減少秸稈燃燒帶來的空氣污染
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：15引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
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