為了研究視神經(jīng)病變誘導(dǎo)基因（OPTN）的分子機(jī)制，科研人員用OPTN基因的部分DNA片段構(gòu)建表達(dá)載體，導(dǎo)入細(xì)胞后轉(zhuǎn)錄出的RNA會(huì)抑制細(xì)胞中OPTN蛋白的合成。實(shí)驗(yàn)中使用的DNA片段和載體上限制酶的識(shí)別序列如下：

限制酶	BglⅡ	BamHⅠ	HindⅢ	XhoⅠ
識(shí)別序列和切割位點(diǎn)	A↓GATCT TCTAG↑A	G↓GATCC CCTAG↑G	A↓AGCTT TTCGA↑A	G↓TCGAG GAGCT↑C

請(qǐng)回答：
（1）應(yīng)選用BamHⅠ和HindⅢ切割載體質(zhì)粒，理由是

目的基因片段和質(zhì)粒上均含有HindⅢ的酶切位點(diǎn)；BamHⅠ與BglⅠ處理產(chǎn)生的黏性末端相同；BamHⅠ和HindⅢ處理質(zhì)粒后能保證目的基因插入質(zhì)粒的啟動(dòng)子和終止子之間

目的基因片段和質(zhì)粒上均含有HindⅢ的酶切位點(diǎn)；BamHⅠ與BglⅠ處理產(chǎn)生的黏性末端相同；BamHⅠ和HindⅢ處理質(zhì)粒后能保證目的基因插入質(zhì)粒的啟動(dòng)子和終止子之間

。
（2）重組質(zhì)粒上

無(wú)

無(wú)

（填“有”或“無(wú)”）BamHⅠ的識(shí)別序列，因此可通過酶切法鑒定質(zhì)粒是否重組成功，方法如下：用BamHⅠ和XhoⅠ兩種限制酶處理質(zhì)粒，未重組的質(zhì)粒將產(chǎn)生

2

2

種片段，重組的質(zhì)粒將產(chǎn)生

1

1

種片段。
（3）重組質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)胞后，能抑制細(xì)胞中OPTN蛋白合成的原因是

重組質(zhì)粒中OPTN基因部分片段轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA與細(xì)胞中指導(dǎo)OPTN蛋白合成的mRNA互補(bǔ)結(jié)合，阻礙了翻譯過程的進(jìn)行

重組質(zhì)粒中OPTN基因部分片段轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的mRNA與細(xì)胞中指導(dǎo)OPTN蛋白合成的mRNA互補(bǔ)結(jié)合，阻礙了翻譯過程的進(jìn)行

。
（4）要證明導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞中OPTN基因的表達(dá)受到抑制，需要設(shè)置

導(dǎo)入未重組質(zhì)粒（和未導(dǎo)入質(zhì)粒）的細(xì)胞

導(dǎo)入未重組質(zhì)粒（和未導(dǎo)入質(zhì)粒）的細(xì)胞

作為對(duì)照組。通常采用

抗原-抗體雜交

抗原-抗體雜交

法檢測(cè)細(xì)胞中OPTN蛋白的表達(dá)水平。