T-2毒素是一種由霉菌分泌的脂溶性小分子，可通過污染飼料引起畜禽中毒反應(yīng)。CYP3A是豬體內(nèi)降解T-2毒素的關(guān)鍵酶，T-2毒素可誘導(dǎo)CYP3A基因表達水平升高。

（1）T-2毒素是霉菌的

次級

次級

（選填“初級”或“次級”）代謝產(chǎn)物，主要以

自由擴散

自由擴散

方式進入豬細(xì)胞。
（2）B1和B2是CYP3A基因啟動子上游的兩個調(diào)控序列，為研究T-2毒素誘導(dǎo)CYP3A基因表達的機理，研究者首先將不同調(diào)控序列分別和CYP3A基因啟動子及熒光素酶基因（LUC基因）連接構(gòu)建表達載體，再分別導(dǎo)入豬肝細(xì)胞，然后向各組豬肝細(xì)胞培養(yǎng)液中加入

等量的T-2毒素

等量的T-2毒素

，適宜條件下進行培養(yǎng)；24h后檢測LUC酶活性，計算啟動子活性相對值，結(jié)果如圖1所示。據(jù)圖可知，B1和B2調(diào)控序列是CYP3A基因響應(yīng)T-2毒素的核心元件，理由是

缺失兩個調(diào)控序列或其中任一個，T-2毒素都不能誘導(dǎo)啟動子活性增強

缺失兩個調(diào)控序列或其中任一個，T-2毒素都不能誘導(dǎo)啟動子活性增強

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（3）研究表明NF-Y和Sp1兩種蛋白均參與T-2毒素對CYP3A的誘導(dǎo)，B2是Sp1的結(jié)合位點。研究者推測，NF-Y通過與B1結(jié)合，與Sp1共同調(diào)控CYP3A基因的表達。
①為證明B1是NF-Y的結(jié)合位點，研究者依據(jù)B1序列制備了野生型和突變型探針，分別與豬肝細(xì)胞核蛋白提取物混合，實驗分組及結(jié)果如圖2．據(jù)實驗結(jié)果推測，第4組出現(xiàn)阻滯帶的原因是

結(jié)合位點突變的探針不能結(jié)合核蛋白中的NF-Y，也不會競爭NF-Y與標(biāo)記探針的結(jié)合，所以第4組與第2組同樣位置出現(xiàn)阻滯帶

結(jié)合位點突變的探針不能結(jié)合核蛋白中的NF-Y，也不會競爭NF-Y與標(biāo)記探針的結(jié)合，所以第4組與第2組同樣位置出現(xiàn)阻滯帶

，進而推測第5組結(jié)果產(chǎn)生的原因是

NF-Y的抗體結(jié)合NF-Y，因此第5組中出現(xiàn)標(biāo)記探針、NF-Y和NF-Y抗體的結(jié)合物，結(jié)合物分子量大，阻滯帶的位置更靠后

NF-Y的抗體結(jié)合NF-Y，因此第5組中出現(xiàn)標(biāo)記探針、NF-Y和NF-Y抗體的結(jié)合物，結(jié)合物分子量大，阻滯帶的位置更靠后

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②研究者設(shè)計實驗進一步證明了NF-Y和Sp1通過互作共同發(fā)揮調(diào)控功能，實驗設(shè)計思路是：增大或縮小B1和B2兩者之間的距離，檢測CYP3A基因的啟動子活性。據(jù)此分析，實驗假設(shè)是

NF-Y和Sp1通過互作共同發(fā)揮調(diào)控功能，它們之間的距離是發(fā)揮作用的最佳距離

NF-Y和Sp1通過互作共同發(fā)揮調(diào)控功能，它們之間的距離是發(fā)揮作用的最佳距離

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