通過咽拭子取樣進(jìn)行 RT-PCR 技術(shù)檢測(cè)是目前臨床上診斷新型冠狀病毒感染疑似患者的常用方法,用于核酸檢測(cè)的 RT-PCR 試劑盒的部分工作原理簡(jiǎn)圖如圖。回答下列問題:
(1)RT-PCR 是指以病毒的 RNA 為模板通過
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
過程合成 cDNA,并對(duì) cDNA 進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增的過程。PCR 擴(kuò)增時(shí),退火溫度的設(shè)定是成敗的關(guān)鍵。退火溫度過高會(huì)破壞引物
引物
與模板
模板
的堿基配對(duì)。退火溫度的設(shè)定與引物長(zhǎng)度、堿基組成有關(guān),長(zhǎng)度相同但G-C
G-C
含量高的引物需要設(shè)定更高的退火溫度。
(2)利用 RT-PCR 試劑盒對(duì)新型冠狀病毒進(jìn)行檢測(cè)時(shí),除借助上述 RT-PCR 技術(shù)外,還需要有特異性探針,利用該探針對(duì)新型冠狀病毒進(jìn)行檢測(cè)的原理是分子雜交
分子雜交
。
(3)除核酸檢測(cè)外,研究人員還研發(fā)了基于病毒蛋白的檢測(cè)技術(shù),該項(xiàng)技術(shù)的關(guān)鍵是生產(chǎn)出能與新冠病毒結(jié)合的特異性抗體。生產(chǎn)該種抗體的大致方案如下:
①向小鼠體內(nèi)注射新冠病毒的抗原蛋白;②分離免疫小鼠的 B 淋巴細(xì)胞,并與小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合,多次篩選、檢測(cè),最終獲得所需雜交瘤細(xì)胞;③將獲得的雜交瘤細(xì)胞在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng),獲得大量的特異性抗體。
上述生產(chǎn)抗體的方案中使用的技術(shù)手段有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合
動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞融合
;其中步驟②中經(jīng)多次篩選、檢測(cè)后遭淘汰的細(xì)胞有B細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞及B-B型、瘤-瘤型融合細(xì)胞
B細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞及B-B型、瘤-瘤型融合細(xì)胞
; 步驟③大規(guī)模培養(yǎng)時(shí)要注意定期更換培養(yǎng)液,其目的是防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害
防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害
。獲得雜交瘤細(xì)胞后,常用的培養(yǎng)方法除了體外培養(yǎng),還有注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖
注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖
。