孔雀石綠（簡稱MG）是廣泛使用的有機染料，在自然環(huán)境中極難降解，容易引起土壤污染，進而危害人體健康。因此從土壤中分離和篩選出高效的MG降解菌有非常重要的意義。已知MG在水中溶解度低，含過量MG的固體培養(yǎng)基不透明。

（1）培養(yǎng)基的配制：MG降解菌富集培養(yǎng)基需含有NaH₂PO₄、KH₂PO₄、NaCl、NH₄Cl、CaCl₂、MgSO₄、水等，再加

MG

MG

作為唯一碳源。配制好的培養(yǎng)基，需用

高壓蒸汽滅菌

高壓蒸汽滅菌

法進行滅菌。
（2）MG高效降解菌株的富集：如圖所示，將1.0g土樣接入含上述配制好的培養(yǎng)液的三角瓶中，將三角瓶置于30℃、180r/min搖床中振蕩培養(yǎng)1～2天，振蕩培養(yǎng)的目的是

目的菌充分接觸培養(yǎng)液中的營養(yǎng)物質

目的菌充分接觸培養(yǎng)液中的營養(yǎng)物質

、

增大培養(yǎng)基中O₂含量

增大培養(yǎng)基中O₂含量

，直至培養(yǎng)液變渾濁后，換瓶重復操作2-3次，以達到富集的目的。
（3）MG高效降解菌株的分離和純化：圖中所示的分離純化細菌的方法是

稀釋涂布平板法

稀釋涂布平板法

，用該方法統(tǒng)計樣品的菌落數(shù)目比活菌的實際數(shù)目

少

少

（“少”或“多”），原因是

當兩個或多個細胞連在一起時，在平板上只觀察到一個菌落

當兩個或多個細胞連在一起時，在平板上只觀察到一個菌落

。
（4）MG高效降解菌株的鑒定：將純化獲得的菌種接種于含過量MG的固體培養(yǎng)基（其他營養(yǎng)成分等適宜）上，根據(jù)培養(yǎng)基是否出現(xiàn)

透明圈

透明圈

就可以鑒別出目的菌株，原因是

目的菌株通過降解MG生長，使菌落周圍的培養(yǎng)基變透明，出現(xiàn)透明圈

目的菌株通過降解MG生長，使菌落周圍的培養(yǎng)基變透明，出現(xiàn)透明圈

。