當(dāng)前位置： 2022-2023學(xué)年江蘇省常州市金壇區(qū)高二（下）期中生物試卷> 試題詳情

如圖是將乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過(guò)程示意圖。巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營(yíng)養(yǎng)型酵母，能將甲醇作為其唯一碳源，此時(shí)AOX1基因受到誘導(dǎo)而表達(dá)，圖中pPIC9K質(zhì)粒上片段5'AOX1和片段3'AOX1（TT）分別是基因AOX1的啟動(dòng)子和終止子。該酵母菌體內(nèi)無(wú)天然質(zhì)粒，科學(xué)家改造出了圖1所示質(zhì)粒用作載體，其與目的基因形成的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切后可以與酵母菌染色體發(fā)生同源重組，將目的基因整合于染色體中以實(shí)現(xiàn)表達(dá)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

注：
①限制酶識(shí)別序列SnaBⅠ：TAC↓GTA，AvrⅡ：C↓CTAG，SacⅠ：GAGCT↓C，BglⅡ：A↓GATCT。
②HBsAg基因中的白色箭頭表示基因轉(zhuǎn)錄的方向
（1）用PCR技術(shù)擴(kuò)增HBsAg基因時(shí)，所用的原料是
脫氧核苷酸
脫氧核苷酸
，所用的Taq酶需要
Mg²⁺
Mg²⁺
激活。
（2）為實(shí)現(xiàn)HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組，設(shè)計(jì)引物時(shí)需要在引物的
5’
5’
端添加相應(yīng)限制酶的識(shí)別序列，則在HBsAg基因兩側(cè)的A和B位置添加的堿基序列分別是
TACGTA
TACGTA
、
CCTAGG
CCTAGG
，這樣設(shè)計(jì)的優(yōu)點(diǎn)是
避免目的基因反向接入質(zhì)粒
避免目的基因反向接入質(zhì)粒
。
（3）酶切獲取HBsAg基因后，需用
T4DNA連接酶
T4DNA連接酶
（填“EcoliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）將其連接到pPIC9K質(zhì)粒上，形成重組質(zhì)粒，構(gòu)建重組質(zhì)粒的目的是
讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和遺傳，并使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用
讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和遺傳，并使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用
。
（4）圖1中的pPIC9K質(zhì)粒若用限制酶SnaBI、BglII聯(lián)合酶切，獲得的DNA片段的長(zhǎng)度分別是38kb、27kb、67kb,若用限制酶BglⅡ、AvrⅡ聯(lián)合酶切，得到的DNA片段的長(zhǎng)度分別是38kb、40kb、54kb；已知HBsAg基因長(zhǎng)度是55kb。步驟3中應(yīng)選用限制酶
BglII
BglII
來(lái)切割重組質(zhì)粒以獲得重組DNA，切割后的重組DNA的長(zhǎng)度是
136 kb
136 kb
。
（5）轉(zhuǎn)化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間后，需要向其中加入甲醇，其目的是
誘導(dǎo)HBsAg基因表達(dá)
誘導(dǎo)HBsAg基因表達(dá)
。

【答案】脫氧核苷酸；Mg²⁺；5’；TACGTA；CCTAGG；避免目的基因反向接入質(zhì)粒；T4DNA連接酶；讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和遺傳，并使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用；BglII；136 kb；誘導(dǎo)HBsAg基因表達(dá)

【解答】

【點(diǎn)評(píng)】

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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：7引用：1難度：0.6

相似題

1．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯(cuò)誤的是（　?。?br />

A．若某基因是從人的細(xì)胞內(nèi)提取mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成的，則該基因中不含啟動(dòng)子序列

B．?dāng)U增目的基因時(shí)，利用耐高溫的DNA連接酶從引物a、b的3′-端進(jìn)行子鏈合成

C．導(dǎo)入人血清白蛋白基因的綿羊受體細(xì)胞是乳腺細(xì)胞

D．利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法可將含有目的基因的重組質(zhì)粒整合到植物受體細(xì)胞的染色體DNA上

發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

解析

2．經(jīng)由食物攝取過(guò)量生物胺會(huì)引起頭痛、胃腸道不適和過(guò)敏等不良反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)甚至危及生命，因此必須對(duì)食品中生物胺的含量進(jìn)行減控。微生物來(lái)源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國(guó)科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá)。
（1）通過(guò)上述基因工程技術(shù)獲取目標(biāo)產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是

（填寫(xiě)下列編號(hào)）。
①篩選和鑒定含目的基因的受體細(xì)胞
②選用合適的方法獲取目的基因
③借助發(fā)酵工程規(guī)模化生產(chǎn)目標(biāo)蛋白
④目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
⑤目的基因和運(yùn)載體重組構(gòu)建表達(dá)載體
（2）在PCR過(guò)程中，引物的功能是

。
A．啟動(dòng)DNA復(fù)制
B．規(guī)定擴(kuò)增區(qū)間
C．解旋DNA雙鏈
D．充當(dāng)復(fù)制模板

（3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設(shè)計(jì)的PCR引物應(yīng)為圖甲中的

。
（4）獲取目的基因后，需要和載體重組導(dǎo)入受體細(xì)胞。載體的化學(xué)本質(zhì)是

（填DNA或RNA/DNA或RNA）。
（5）在常規(guī)PCR的每一輪擴(kuò)增反應(yīng)中，溫度隨時(shí)間的變化順序是圖乙中的

。
（6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開(kāi)后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用

和

切開(kāi)，才能與MCO片段高效連接。
（7）下列實(shí)驗(yàn)操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是

。
A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
B．在選擇培養(yǎng)基中添加X(jué)-gal試劑，以克隆的顏色進(jìn)行鑒別
C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進(jìn)行PCR檢測(cè)
D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長(zhǎng)與否加以鑒別
發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5
解析
3．用限制酶EcoRⅤ單獨(dú)切割某普通質(zhì)粒，可產(chǎn)生14kb（1kb即1000個(gè)堿基對(duì)）的長(zhǎng)鏈，而同時(shí)用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ聯(lián)合切割該質(zhì)粒，可得到三種長(zhǎng)度的DNA片段，見(jiàn)圖（其中*表示EcoRⅤ限制酶切割后的一個(gè)黏性末端）。

若用MboⅠ限制酶單獨(dú)切割該普通質(zhì)粒，則產(chǎn)生的DNA片段的長(zhǎng)度為（　?。?/h2>
A．2.5和5.5 B．2.5和6 C．5.5和8 D．6和8
發(fā)布：2024/11/14 4:0:2組卷：89引用：9難度：0.7
解析

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1．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ?。?br />

1．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯(cuò)誤的是（　?。?br />