非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒（ASFV）感染家豬和各種野豬引起的一種急性、出血性、烈性傳染病，被稱作養(yǎng)豬業(yè)的“頭號(hào)殺手”。某科研小組將ASFV外殼蛋白基因?qū)胴i細(xì)胞中，利用核移植技術(shù)培育轉(zhuǎn)基因豬，從而得到自動(dòng)產(chǎn)生ASFV抗體的個(gè)體。其流程圖如圖所示。

（1）體外獲得大量的ASFV外殼蛋白基因可采用PCR技術(shù)，其原理是：

體內(nèi)DNA復(fù)制的原理

體內(nèi)DNA復(fù)制的原理

。進(jìn)行PCR時(shí)需設(shè)計(jì)兩種引物，其原因是

DNA復(fù)制時(shí)兩條鏈均作為模板鏈

DNA復(fù)制時(shí)兩條鏈均作為模板鏈

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（2）圖中體外采集的卵母細(xì)胞需培養(yǎng)至

減II中期（MII中期）

減II中期（MII中期）

時(shí)期，將卵母細(xì)胞去核的目的是

保證重組細(xì)胞中的核基因只來自基因改造后的B豬的細(xì)胞核

保證重組細(xì)胞中的核基因只來自基因改造后的B豬的細(xì)胞核

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（3）從B豬體內(nèi)取組織塊剪碎后用

胰蛋白酶

胰蛋白酶

處理制成單細(xì)胞懸液后通過基因改造、核移植技術(shù)獲得重組細(xì)胞，再將重組細(xì)胞放入含5% CO₂的培養(yǎng)箱中，其中CO₂的主要作用是

維持培養(yǎng)液的pH值穩(wěn)定

維持培養(yǎng)液的pH值穩(wěn)定

。培養(yǎng)重組細(xì)胞的培養(yǎng)液中，還需要添加

血清或血漿

血清或血漿

等天然成分。
（4）為了檢測(cè)轉(zhuǎn)基因的D豬是否產(chǎn)生相應(yīng)抗體，應(yīng)采用的檢測(cè)方法是

抗原一抗體雜交

抗原一抗體雜交

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