圖甲為應(yīng)用基因編輯去除CFTR基因(控制CFTR蛋白的合成),獲得患囊性纖維病的編輯小鼠4的培育流程。請(qǐng)回答下列問題:
(1)對(duì)1號(hào)小鼠進(jìn)行超數(shù)排卵處理,收集并選取處在
減數(shù)第二次分裂中期
減數(shù)第二次分裂中期
時(shí)期的卵母細(xì)胞用于核移植。
(2)采集2號(hào)小鼠的組織細(xì)胞,放置于37℃的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),其中CO2的作用是 維持培養(yǎng)液的pH
維持培養(yǎng)液的pH
。
(3)嘗試用基因療法給剛出生的編輯小鼠4號(hào)治療囊性纖維病。其中,將CFTR基因插入質(zhì)粒中,構(gòu)建了基因表達(dá)載體,其部分結(jié)構(gòu)和酶切位點(diǎn)的示意圖如乙,圖中E1~E,四種限制酶產(chǎn)生的黏性末端各不相同。據(jù)圖推斷,在將CFTR基因插入質(zhì)粒時(shí),應(yīng)使用 E2、E4
E2、E4
限制酶,目的是 保證 CFTR基因完整且能與載體正確連接
保證 CFTR基因完整且能與載體正確連接
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(4)為獲得更多基因編輯小鼠,可在胚胎移植前對(duì)胚胎進(jìn)行 分割
分割
,所需要的主要儀器設(shè)備包括 實(shí)體顯微鏡和顯微操作儀
實(shí)體顯微鏡和顯微操作儀
。
(5)請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn),從分子水平檢測CFTR基因是否被導(dǎo)入編輯小鼠4號(hào)并正常表達(dá)。
①實(shí)驗(yàn)思路:用含CFTR基因的放射性同位素探針與提取的編輯小鼠4號(hào) DNA 進(jìn)行 DNA 分子雜交,觀測是否出現(xiàn)相應(yīng)的雜交帶;利用 CFTR蛋白抗體與編輯小鼠4號(hào)提取的蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原-抗體雜交,觀測是否出現(xiàn)相應(yīng)的雜交帶
用含CFTR基因的放射性同位素探針與提取的編輯小鼠4號(hào) DNA 進(jìn)行 DNA 分子雜交,觀測是否出現(xiàn)相應(yīng)的雜交帶;利用 CFTR蛋白抗體與編輯小鼠4號(hào)提取的蛋白質(zhì)進(jìn)行抗原-抗體雜交,觀測是否出現(xiàn)相應(yīng)的雜交帶
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②預(yù)期結(jié)果:若觀測到相應(yīng)的雜交帶,則 CFTR基因被導(dǎo)入編輯小鼠4號(hào),否則沒有;若觀測到相應(yīng)的雜交帶,則 CFTR基因正常表達(dá),否則沒有
若觀測到相應(yīng)的雜交帶,則 CFTR基因被導(dǎo)入編輯小鼠4號(hào),否則沒有;若觀測到相應(yīng)的雜交帶,則 CFTR基因正常表達(dá),否則沒有
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