回答與轉(zhuǎn)基因植物的培育和植物克隆有關(guān)的問題：
（1）農(nóng)桿菌介導(dǎo)法是目前植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的常用方法。使用該方法需先獲取活性強(qiáng)的農(nóng)桿菌菌液，再通過冰浴、離心、去上清液等相應(yīng)的溶液處理，最后加入適量預(yù)冷的含15%甘油的

CaCl₂

CaCl₂

溶液，制成感受態(tài)農(nóng)桿菌細(xì)胞。
（2）目的基因和質(zhì)粒的正確連接是否成功與多種因素有關(guān)，為提高重組質(zhì)粒的形成效率，可用兩種不同的限制性核酸內(nèi)切酶處理含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒，在具有足量酶且其他環(huán)境條件適宜的反應(yīng)體系中，還需要考慮到

限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶（工具酶）的處理時(shí)間、加入目的基因與質(zhì)粒的比例

限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶（工具酶）的處理時(shí)間、加入目的基因與質(zhì)粒的比例

（答出2點(diǎn)即可）等因素，再分離得到高純度的重組質(zhì)粒。
（3）將感受態(tài)農(nóng)桿菌細(xì)胞的菌液和高純度的重組質(zhì)粒在離心管內(nèi)輕緩混合后，將離心管置于液氮中速凍5min迅速轉(zhuǎn)移至37℃水浴靜置5min,再轉(zhuǎn)移至冰浴中靜置5min,這一系列操作的目的是

有利于重組質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞中

有利于重組質(zhì)粒進(jìn)入細(xì)胞中

，可以提高轉(zhuǎn)化效率。若重組質(zhì)粒中的標(biāo)記基因是卡那霉素抗性基因，再加入適量的

A

A

（填序號(hào)），并在28～30℃的搖床上慢速振蕩培養(yǎng)1～2h,目的是讓菌體復(fù)蘇、表達(dá)抗體和

大量增殖

大量增殖

。
A.不含卡那霉素的LB培養(yǎng)液
B.含有適量卡那霉素的LB培養(yǎng)液
C.含有卡那霉素的人工培養(yǎng)液“199”
D.含有適量卡那霉素的MS培養(yǎng)基
（4）由于植物

細(xì)胞壁

細(xì)胞壁

（填細(xì)胞結(jié)構(gòu)）的存在，植物的組織培養(yǎng)和克隆有一定難度，可以通過使轉(zhuǎn)化成功的農(nóng)桿菌感染植物的原生質(zhì)體來解決這一難題，將導(dǎo)入外源基因的原生質(zhì)體培養(yǎng)成胚性細(xì)胞，胚性細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)，可通過胚胎發(fā)生和器官發(fā)生兩條途徑形成轉(zhuǎn)基因植株，請(qǐng)簡(jiǎn)要寫出其中一條從胚胎細(xì)胞到形成完整植株的途徑：

胚性細(xì)胞培養(yǎng)形成細(xì)胞團(tuán)，經(jīng)球形胚、心形胚和胚狀體，最后發(fā)育成植株（或胚性細(xì)胞培養(yǎng)形成細(xì)胞團(tuán)，細(xì)胞團(tuán)增殖為愈傷組織，先在發(fā)芽培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生芽，再經(jīng)過生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根，形成完整植株）

胚性細(xì)胞培養(yǎng)形成細(xì)胞團(tuán)，經(jīng)球形胚、心形胚和胚狀體，最后發(fā)育成植株（或胚性細(xì)胞培養(yǎng)形成細(xì)胞團(tuán)，細(xì)胞團(tuán)增殖為愈傷組織，先在發(fā)芽培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生芽，再經(jīng)過生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根，形成完整植株）

。