30.異丁醇具有燃值高、能量密度高等優(yōu)點(diǎn),其開發(fā)和利用對(duì)優(yōu)化我國(guó)能源結(jié)構(gòu)和保護(hù)環(huán)境有非常重要的意義。科研人員構(gòu)建了一種表達(dá)載體pUC18(如圖1)導(dǎo)入酵母菌,用于過量表達(dá)ILV2、ILV5、ILV3、AR010基因,以期實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)異丁醇。圖2是酵母細(xì)胞中葡萄糖代謝產(chǎn)生異丁醇、乙醇和乙酸的示意圖,其中基因ADHs和ALDs分別控制E酶和F酶的合成。回答下列問題:
?
(1)將基因ILV2、ILV5、ILV3和AR010依次插入到質(zhì)粒上的目的基因插入位點(diǎn),選用高表達(dá)啟動(dòng)子pTEF1和
作為調(diào)控序列。pTEF1是
識(shí)別并結(jié)合的位點(diǎn)。
(2)科研人員先將pUC18轉(zhuǎn)化到大腸桿菌細(xì)胞中,以便篩選、保存和擴(kuò)增重組質(zhì)粒。重組質(zhì)粒上的
(填“真核”或“原核”)生物復(fù)制原點(diǎn)使pUC18能在大腸桿菌中擴(kuò)增。已知氨芐青霉素抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成,pUC18中氨芐青霉素抗性基因的作用是
。
(3)提取完整的重組pUC18并導(dǎo)入組氨酸缺陷型釀酒酵母細(xì)胞中,將菌株接種在培養(yǎng)基中以獲得單菌落,該過程稱為微生物的
培養(yǎng)。除必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外,該選擇培養(yǎng)基中需要添加的物質(zhì)是
。
A.組氨酸
B.氨芐青霉素
C.瓊脂
(4)根據(jù)圖示酵母細(xì)胞葡萄糖的代謝途徑,為了進(jìn)一步提高異丁醇的產(chǎn)量,應(yīng)對(duì)基因
進(jìn)行改造使其表達(dá)產(chǎn)物減少。