16.IKK激酶參與動物體內(nèi)免疫細(xì)胞的分化。臨床上發(fā)現(xiàn)某重癥聯(lián)合免疫缺陷(SCID)患兒KK基因編碼區(qū)第1183位堿基T突變?yōu)镃,導(dǎo)致IKK上第395位酪氨酸被組氨酸代替。為研究該患兒發(fā)病機(jī)制,研究人員利用純合野生鼠應(yīng)用大引物PCR定點(diǎn)誘變技術(shù)培育出SCID模型小鼠(純合),主要過程如圖1、2。分析回答:
(1)在PCR反應(yīng)體系中,需加入引物、IKKB基因、緩沖液、Mg2+等外,還需加入
等。
(2)在圖1獲取突變基因過程中,需要以下3種引物:
引物A |
5′-CCCCAACCGGAAAGTGTCA-3′(下劃線字母為突變堿基) |
引物B |
5′-TAAGCTTCGAACATCCTA--3′(下劃線部分為限制酶HindⅢ識別序列) |
引物C |
5′-GTGAGCTCGCTGCCCCAA-3′(下劃線部分為限制酶SacⅠ識別序列) |
則PCR1中使用的引物有
,PCR2中使用的引物有
和圖中大引物的
(①②)鏈。
(3)PCR的反應(yīng)程序為:94℃3min;94℃30s,58℃30s,72℃50s,30個循環(huán)。在循環(huán)之前的94℃3min處理為預(yù)變性;循環(huán)中72℃處理的目的是
。
(4)據(jù)圖2分析代孕母鼠對移入子宮的胚胎基本不發(fā)生免疫反應(yīng),這為
提供了可能。
(5)研究人員經(jīng)鑒定、篩選獲得一只轉(zhuǎn)基因雜合鼠F
0,并確認(rèn)突變基因已經(jīng)穩(wěn)定同源替代IKK基因,請你設(shè)計完成獲得SCID模型鼠的實驗步驟:
①雜交親本:
,雜交得F
1;
②F
1雌雄鼠隨機(jī)交配得F
2;
③提取F
2每只小鼠的基因組DNA,采用分子生物學(xué)方法,利用TKK基因探針和突變基因探針進(jìn)行篩選,則
為模型鼠。