利用轉(zhuǎn)基因的工程菌生產(chǎn)藥用蛋白,近些年在我國制藥行業(yè)中異軍突起。圖1是基因工程常用的一種質(zhì)粒;圖2是利用該質(zhì)粒構(gòu)建的一種基因表達(dá)載體。各限制酶質(zhì)粒上分別只有一處識別序列,將質(zhì)粒和重組質(zhì)粒用相應(yīng)的限制酶酶切后,得到的DNA片段長度如表中數(shù)據(jù)。請回答下列問題:
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質(zhì)粒 |
重組質(zhì)粒 |
BglⅡ |
6.0kb |
7.1kb |
ClaⅠ |
6.0kb |
2.3kb,4.8kb |
PstⅠ |
6.0kb |
1.5kb,5.6kb |
(1)在基因工程中作為載體的質(zhì)粒應(yīng)具備的基本條件有
在受體細(xì)胞中能自我復(fù)制(或整合到受體DNA上,隨受體DNA同步復(fù)制)、具有標(biāo)記基因、有一個至多個限制酶切割位點
在受體細(xì)胞中能自我復(fù)制(或整合到受體DNA上,隨受體DNA同步復(fù)制)、具有標(biāo)記基因、有一個至多個限制酶切割位點
,而作為基因表達(dá)載體,除滿足上述基本條件外,還需具有
啟動子和終止子
啟動子和終止子
。
(2)為了獲得更多的目的基因,可用PCR擴增,PCR的原理是
DNA的半保留復(fù)制
DNA的半保留復(fù)制
。PCR反應(yīng)體系中加入dNTP后,這些物質(zhì)既可以作為
原料
原料
,也可以為反應(yīng)提供
能量
能量
。
(3)PCR中通常會得到不同的DNA產(chǎn)物,常采用
瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖凝膠電泳
法鑒定,不同DNA片段因
相對分子質(zhì)量、所帶電荷
相對分子質(zhì)量、所帶電荷
等不同,在電場中的遷移速率也不同,因而可以形成不同條帶。
(4)已知質(zhì)粒被切除的片段長度為0.5kb,則與質(zhì)粒結(jié)合的目的基因長度為
1.6
1.6
kb。質(zhì)粒上ClaⅠ與PstⅠ區(qū)域之間的長度為2.4kb(如圖1所示),結(jié)合圖2分析,目的基因上ClaⅠ、PstⅠ兩種限制酶的切割位點分別為
a和b
a和b
(在a、b兩點中選填)。
(5)培養(yǎng)受體菌時,在培養(yǎng)基中應(yīng)加入適量的
氨芐青霉素
氨芐青霉素
,可以將導(dǎo)入重組質(zhì)粒和普通質(zhì)粒的受體菌都篩選出來。