當前位置： 2023年云南省玉溪市高考生物第一次質檢試卷> 試題詳情

第一代DNA測序技術是由桑格等科學家發(fā)明的，又稱為鏈終止法測序，科學家用該技術測定了噬菌體X174的基因組序列，操作流程如圖所示，回答下列問題：

（1）將碎片化的DNA片段連接到質粒載體中，需要用到
限制性內切酶
限制性內切酶
、
DNA連接酶
DNA連接酶
等工具酶。
（2）為保證放射自顯影觀察條帶，應選用
³²P
³²P
（填“¹⁸O”或“³²P”）標記ddNTP。
（3）在凝膠電泳中DNA分子的遷移速率與DNA分子的
DNA分子的大小和構象
DNA分子的大小和構象
、
凝膠的濃度
凝膠的濃度
有關。
（4）ddNTP法循環(huán)測序中，用到PCR技術，該技術的原理是
DNA的半保留復制
DNA的半保留復制
，加入ddNTP會使PCR反應終止的原因可能是
連接到子鏈末端的ddNTP不能再與其它脫氧核苷酸形成3′，5′-磷酸二酯鍵，導致ddNTP一旦連接到子鏈末端，子鏈便停止延伸
連接到子鏈末端的ddNTP不能再與其它脫氧核苷酸形成3′，5′-磷酸二酯鍵，導致ddNTP一旦連接到子鏈末端，子鏈便停止延伸
。

【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．

【答案】限制性內切酶；DNA連接酶；³²P；DNA分子的大小和構象；凝膠的濃度；DNA的半保留復制；連接到子鏈末端的ddNTP不能再與其它脫氧核苷酸形成3′，5′-磷酸二酯鍵，導致ddNTP一旦連接到子鏈末端，子鏈便停止延伸

【解答】

【點評】

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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：6引用：2難度：0.7

相似題

1．PCR是利用體內DNA復制的原理，進行生物體外復制特定 DNA片段的核酸合成技術。請回答有關問題：
（1）PCR反應的基本步驟是變性、

、

。
（2）科學家研究發(fā)現(xiàn) DNA聚合酶只能催化

方向的聚合反應。圖1表示細胞內染色體 DNA的半保留復制過程，有一條子鏈是先合成短的DNA片段（稱為岡崎片段），再形成較長的分子，可推測參與以上過程的酶有DNA聚合酶、

、

。在PCR過程中無岡崎片段形成，原因是細胞內染色體 DNA的復制過程特點是

，PCR過程的特點是

。
（3）雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）與脫氧核苷三磷酸（dNTP）的結構如圖2所示。已知 ddNTP按堿基互補配對的方式加到正在復制的子鏈中后，子鏈的延伸立即終止?，F(xiàn)有一些序列為5'-GCCTAAGATCGCA-3'的DNA分子單鏈片段，通過PCR技術獲得以堿基“C”為末端（3'為堿基C）不同長度的子鏈DNA片段，將以上子鏈 DNA片段進行電泳分離可得到

種不同長度的子鏈 DNA片段。為使實驗順利進行，在PCR反應管中除了單鏈模板、引物、DNA 聚合酶和相應的緩沖液等物質外，還需要加入下列哪組原料

。
A.dGTP，dATP，dTTP
B.dGTP、dATP、dTTP、dCTP、ddCTP
C.dGTP，dATP，dTTP，dCTP
D.ddGTP，ddATP，ddTTP，ddCTP
（4）如圖3為形成單鏈DNA后，再進行PCR擴增示意圖。

催化①過程的酶是

；核酸酶H的作用是

。如果某RNA單鏈中一共有80個堿基，其中C有15個，A與U之和占該鏈堿基含量的40%，經過以上若干過程后共獲得8個雙鏈 DNA，此過程中至少需加入G參與組成的核苷酸數(shù)量為

（以上過程不考慮引物）。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：19引用：1難度：0.7
解析
2．PCR是利用體內DNA復制的原理，進行生物體外復制特定DNA片段的核酸合成技術。請回答有關問題：

（1）PCR反應的基本步驟是變性、復性、

。
（2）雙脫氧核苷三磷酸（ddNTP）與脫氧核苷三磷酸（dNTP）的結構如圖2所示。已知ddNTP按堿基互補配對的方式加到正在復制的子鏈中后，子鏈的延伸立即終止。現(xiàn)主有一些序列為5'-GCCTAAGATCGCA-3'的DNA分子單鏈片段，通過PCR技術獲得以堿基“C”為末端（3'為堿基C）不同長度的子鏈DNA片段，將以上子鏈DNA片段進行電泳分離可得到

種不同長度的子鏈DNA片段。為使實驗順利進行，在PCR反應管中除了單鏈模板、引物、DNA聚合酶和相應的緩沖液等物質外，還需要加入下列哪組原料

。
A．dGTP、dATP、dTTP
B．dGTR、dATP、dTTP、dCTP、ddCTP
C．dGTP、dATP、dTTP、dCTP
D．ddGTP、ddATP、ddTTP、ddCTP
（3）科學家研究發(fā)現(xiàn)DNA聚合酶只能催化

方向的聚合反應。圖1表示細胞內染色體DNA的復制過程，有一條子鏈是先合成短的DNA片段（稱為岡崎片段），再形成較長的分子，可推測參與以上過程的酶有DNA連接酶

、

。在PCR過程中無岡崎片段形成，原因是細胞內染色體DNA的復制過程特點是

，PCR過程的特點是

。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：12引用：1難度：0.7
解析
3．Sanger法DNA測序技術的核心原理：由于雙脫氧核苷酸（ddNTP）的2'和3'都不含羥基，其在DNA的合成過程中不能形成磷酸二酯鍵，因此可以中斷DNA分子合成反應。在四個含有4種脫氧核苷酸（dNTP）的DNA體外合成反應體系中分別加入一定比例帶有放射性同位素標記的ddNTP（分別為：ddATP，ddCTP，ddGTP和ddTTP），在PCR過程中復制隨機終止，產生四組不同長度的一系列終止處帶有標記的DNA片段。然后在變性凝膠（加入尿素等堿性物質）上進行電泳和放射自顯影后，可以根據電泳帶的位置確定待測分子的DNA序列，具體過程見圖。
注：ddA是ddATP的縮寫形式。

（1）如圖1中Ⅰ過程橫線①中應該加入的物質是

，dNTP中dATP與ATP在組成上的區(qū)別是

，為什么該過程中需要添加引物？
（2）材料中提到“在變性凝膠上進行電泳……”，請解釋“變性”

，為什么要變性處理？

。
（3）如果電泳結果如圖2所示，請寫出待測DNA分子的序列

。
（4）某同學要通過PCR技術獲得被³²P標記且以堿基“C”為末端、不同長度的子鏈DNA片段，在反應管中已經有模板、引物、酶和相應緩沖液等等，還需加入哪些原料

。
發(fā)布：2024/10/26 17:0:2組卷：16引用：1難度：0.7
解析

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