人乳鐵蛋白（hLF）廣泛分布于乳汁等外分泌液，初乳中含量較高，對細(xì)菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人員開展人乳鐵蛋白基因乳腺特異性表達載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染研究，主要流程如圖，圖中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相關(guān)限制酶切點，neo^r為新霉素抗性基因，BLC基因為β-乳球蛋白基因，GFP基因為綠色熒光蛋白基因。請回答：

（1）過程①的基本原理是先以人乳腺細(xì)胞總RNA為模板，通過逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA（互補DNA），再通過PCR技術(shù)擴增相應(yīng)的DNA片段——hLF基因。但是過程①中，不能從人肌肉細(xì)胞中提取RNA用于RT-PCR，這是因為

hLF基因在人肌肉細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄

hLF基因在人肌肉細(xì)胞中不轉(zhuǎn)錄

，在RT-PCR過程中，加入的引物需在

5'

5'

端添加

SalⅠ和BamHⅠ

SalⅠ和BamHⅠ

兩種限制酶的識別序列，以便于hLF基因插入pEB質(zhì)粒中。
（2）過程③中pEBL質(zhì)粒經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)進入山羊乳腺上皮細(xì)胞依據(jù)的原理是

生物膜具有一定的流動性

生物膜具有一定的流動性

。
（3）將轉(zhuǎn)染后的山羊乳腺上皮細(xì)胞先置于含新霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，能夠存活的細(xì)胞應(yīng)該是導(dǎo)入了

pEB質(zhì)粒或pEBL質(zhì)粒

pEB質(zhì)?；騪EBL質(zhì)粒

的細(xì)胞，再利用熒光顯微鏡觀察山羊乳腺上皮細(xì)胞是否有

綠色熒光

綠色熒光

以篩選出轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞。
（4）科研過程中，可以用PCR技術(shù)檢測受體細(xì)胞中的染色體DNA上是否插入了hLF基因或檢測

hLF基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA

hLF基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA

，還可以用

抗原—抗體雜交

抗原—抗體雜交

技術(shù)，檢測hLF基因是否翻譯出人乳鐵蛋白。