人乳鐵蛋白（hLF）廣泛分布于乳汁等外分泌液，初乳中含量較高，對細菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人員開展人乳鐵蛋白基因乳腺特異性表達載體構建及轉(zhuǎn)染研究，主要流程如圖，圖中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相關限制酶切點，neor為新霉素抗性基因，BLC基因為β-乳球蛋白基因，GFP基因為綠色熒光蛋白基因。請回答：
（1）過程①的基本原理是先以人乳腺細胞總RNA為模板，通過逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA（互補DNA），再通過PCR技術擴增相應的DNA片段——hLF基因。但是過程①中，不能從人肌肉細胞中提取RNA用于RT-PCR，這是因為 hLF基因在人肌肉細胞中不轉(zhuǎn)錄hLF基因在人肌肉細胞中不轉(zhuǎn)錄，在RT-PCR過程中，加入的引物需在 5'5'端添加 SalⅠ和BamHⅠSalⅠ和BamHⅠ兩種限制酶的識別序列，以便于hLF基因插入pEB質(zhì)粒中。
（2）過程③中pEBL質(zhì)粒經(jīng)脂質(zhì)體介導進入山羊乳腺上皮細胞依據(jù)的原理是 生物膜具有一定的流動性生物膜具有一定的流動性。
（3）將轉(zhuǎn)染后的山羊乳腺上皮細胞先置于含新霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，能夠存活的細胞應該是導入了 pEB質(zhì)?；騪EBL質(zhì)粒pEB質(zhì)粒或pEBL質(zhì)粒的細胞，再利用熒光顯微鏡觀察山羊乳腺上皮細胞是否有 綠色熒光綠色熒光以篩選出轉(zhuǎn)染成功的細胞。
（4）科研過程中，可以用PCR技術檢測受體細胞中的染色體DNA上是否插入了hLF基因或檢測 hLF基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNAhLF基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，還可以用 抗原—抗體雜交抗原—抗體雜交技術，檢測hLF基因是否翻譯出人乳鐵蛋白。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】hLF基因在人肌肉細胞中不轉(zhuǎn)錄；5'；SalⅠ和BamHⅠ；生物膜具有一定的流動性；pEB質(zhì)?；騪EBL質(zhì)粒；綠色熒光；hLF基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA；抗原—抗體雜交
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：9引用：2難度：0.6
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（1）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應用的生物技術有（答出2項）等。
（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對目的基因進行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程（填序號）。過程②③采用的方法是。
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發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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