紅色熒光蛋白(mScarlet)在細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的定位和動(dòng)態(tài)示蹤等方面有著廣泛的應(yīng)用。研究人員欲構(gòu)建mScarlet蛋白表達(dá)載體,將其轉(zhuǎn)入擬南芥的細(xì)胞中表達(dá)。回答下列問題:
(1)要擴(kuò)增mScarlet基因時(shí),需要先設(shè)計(jì)一對(duì)與mScarlet基因兩端序列互補(bǔ)配對(duì)的引物。為方便構(gòu)建重組質(zhì)粒,在引物中需要增加適當(dāng)?shù)?限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶位點(diǎn)。設(shè)計(jì)引物時(shí),研究人員需要避免引物之間形成 堿基互補(bǔ)配對(duì)堿基互補(bǔ)配對(duì)而導(dǎo)致引物自連。
(2)質(zhì)粒作為基因表達(dá)的載體,應(yīng)具備的基本條件有 具有標(biāo)記基因,能自我復(fù)制具有標(biāo)記基因,能自我復(fù)制(答出2點(diǎn))。除此需要具有啟動(dòng)子和終止子,啟動(dòng)子的作用是 驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA。
(3)構(gòu)建含mScarlet基因的表達(dá)載體還需要使用DNA連接酶,該酶催化形成的化學(xué)鍵是 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵。常見的DNA連接酶中既能連接黏性末端又能連接平末端的是 T4DNA連接酶T4DNA連接酶。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合.
【答案】限制性核酸內(nèi)切酶;堿基互補(bǔ)配對(duì);具有標(biāo)記基因,能自我復(fù)制;驅(qū)動(dòng)目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA;磷酸二酯鍵;T4DNA連接酶
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:1引用:1難度:0.6
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