基因編輯是一種新興的比較精確的能對生物體基因組特定目標基因進行修飾的一種基因工程技術或過程。CRISPR/Cas9系統(tǒng)可對基因組進行定點編輯，其工作原理如圖1所示。人血清白蛋白（HSA）具有重要的醫(yī)用價值，只能從血漿中制備，以基因工程技術獲取重組HSA（rHSA）的兩條途徑如圖2所示。
（1）據(jù)圖1可知，在sgRNA1和sgRNA2的引導下，Cas9使基因中的 磷酸二酯磷酸二酯鍵斷裂，最終實現(xiàn)對靶基因序列的編輯。但該技術有時存在編輯對象出錯而造成“脫靶”，實驗發(fā)現(xiàn)sgRNA的序列長短影響成功率，越短脫靶率越 高高（填“高或“低”）。
（2）獲取HSA基因，首先需采集人的血液，提取 總RNA（mRNA）總RNA（mRNA）合成總cDNA，然后以cDNA為模板，采用 PCRPCR技術擴增HSA基因（序列為5'CTTCGAAATTC-……-TCTCCCGATCGG3'），根據(jù)其兩端序列，則需要選擇的一對引物序列是 AA（填字母）。
A．引物I是5'-CTTCGAAATTC-3'，引物Ⅱ是5'-CCGATCGGGAGA-3'
B．引物I是5'-CTTCGAAATTC-3'，引物Ⅱ是5'-TCTCCCGATCGG-3'
C．引物I是5'-GAAGCTTTAAG-3'，引物Ⅱ是5'-AGAGGGCTAGCC-3
D．引物I是5'-GAAGCTTTAAG-3'，引物Ⅱ是5'-CCGATCGGGAGA-3'
（3）圖甲為獲取的含有目的基因（HSA基因）的DNA片段，Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ為三種限制酶，圖中箭頭所指為三種限制酶的切點：圖乙是三種限制酶的識別序列與酶切位點示意圖；圖丙是Ti質(zhì)粒結構示意圖。若用BamHI切割圖甲所示的DNA片段，獲得目的基因，則需選用 Sau3AⅠSau3AⅠ切割圖丙所示質(zhì)粒，以便構建基因表達載體。上述方案存在一定缺陷，故切割圖甲所示DNA片段的最佳方案是選用 EcoRⅠ和BamHⅠEcoRⅠ和BamHⅠ酶。用上述最佳方案構建基因表達載體，所得重組質(zhì)粒 不一定能不一定能（選填“能”、“不能”或“不一定能”）被BamHⅢ切割。
（4）啟動子通常具有物種及組織特異性，構建在水稻胚乳細胞內(nèi)特異表達rHSA的載體，需要選擇的啟動子是 BB（填字母）。
A．人血細胞啟動子
B．水稻胚乳細胞啟動子
C．大腸桿菌啟動子
D．農(nóng)桿菌啟動子
（5）為證明rHSA具有醫(yī)用價值，須確認rHSA與 HSAHSA的生物學功能一致。
【答案】磷酸二酯；高；總RNA（mRNA）；PCR；A；Sau3AⅠ；EcoRⅠ和BamHⅠ；不一定能；B；HSA
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：79引用：1難度：0.6
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1．基因工程技術又稱為DNA重組技術，回答相關問題：
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（2）利用某植物的成熟葉片為材料，同時構建cDNA文庫和基因組文庫，兩個文庫相比，cDNA文庫中含有的基因數(shù)目比基因組文庫中的少，其原因是．
（3）在基因表達載體中，啟動子是聚合酶識別并結合的部位．若采用原核生物作為基因表達載體的受體細胞，最常用的原核生物是．
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2．科研人員利用大腸桿菌構建了抗蟲基因文庫。最新研究發(fā)現(xiàn)漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有顯著的殺蟲效果，現(xiàn)以p-B質(zhì)粒為載體，構建 AH基因的cDNA文庫。圖1表示p-B質(zhì)粒，其中Cm/表示氯霉素抗性基因，cdB 基因表達產(chǎn)物能抑制大腸桿菌 DNA 復制。圖中箭頭表示相關限制酶的酶切位點，且不同種限制酶識別序列不同，其中AiuI、XbaI、SspI和MfeⅠ識別的堿基序列和酶切位點分別是 AG'CT、T'CTAGA、AAT'ATT、C'AATTG。請分析并回答下列問題：
（1）為獲得AH基因的cDNA，先要從漏斗蜘蛛毒素肽分泌細胞中提取，再通過合成出AH基因的cDNA。若從漏斗蜘蛛其他組織細胞提取，則難以成功，原因是。
（2）若已知AH基因的cDNA兩端部分序列為：5'-AACTATGCGC……CGTAGCCTCT-3'，請寫出PCR擴增該cDNA時的兩個引物對應的局部序列（前10個堿基序列），并標明5'和3'端：，。一個初始雙鏈cDNA經(jīng)四輪循環(huán)后，共消耗這兩種引物的數(shù)量為個。
（3）利用圖中的質(zhì)粒和AH基因構建重組質(zhì)粒時，宜選用限制酶雙酶切質(zhì)粒，再選用限制酶切割目的基因，將切割后獲得的DNA片段混合，經(jīng)DNA連接酶處理后，再與大腸桿菌混合培養(yǎng)，在含有適量氯霉素的培養(yǎng)基中添加適量冷的，以促進轉(zhuǎn)化。
（4）經(jīng)上述處理培養(yǎng)后，其中能繁殖的大腸桿菌中應含有的質(zhì)粒是，原因是。發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：8引用：1難度：0.6 -
3．基因治療是指將外源正?；?qū)氚屑毎约m正或補償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達到治療的目的．干擾素基因缺失的小鼠不能產(chǎn)生成熟淋巴細胞，科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對干擾素基因缺失的小鼠進行了基因治療．請回答：
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（2）將干擾素基因?qū)隕S細胞的方法是，采用可以鑒定目的基因是否插入到受體細胞染色體DNA分子上，再將能正常表達干擾素的細胞轉(zhuǎn)入到小鼠體內(nèi)，這種治療方法稱為．導入ES細胞而不是導入上皮細胞是因為ES細胞在功能上具有．
（3）干擾素基因缺失的小鼠易患某種細菌導致的肺炎，引起這種現(xiàn)象的原因是小鼠缺少成熟的淋巴細胞，降低了小鼠免疫系統(tǒng)的功能．
（4）用于基因治療的基因有三類，一類是把正?；?qū)胗谢蛉毕莸募毎?，以表達出正常性狀來治療，第二類是反義基因，即通過產(chǎn)生的mRNA分子與病變基因產(chǎn)生的進行互補結合，來阻斷非正常蛋白質(zhì)的合成；第三類是編碼可以殺死癌細胞的蛋白酶基因．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：24引用：2難度：0.5
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