偽狂犬病與乙腦在我國豬群中廣泛存在，對養(yǎng)豬業(yè)的持續(xù)發(fā)展造成巨大的經(jīng)濟損失。為此，研究人員擬以偽狂犬病毒為載體，構(gòu)建乙腦病毒主要免疫原性基因PrM重組病毒，為研究豬乙腦病毒與偽狂犬病毒雙價基因工程疫苗奠定基礎(chǔ)。下圖表示表達乙腦病毒PrM基因重組偽狂犬病病毒的構(gòu)建過程，PK、gG、gD為偽狂犬病的主要抗原基因，TK為偽狂犬病的毒性基因，pgG為啟動子，BamHⅠ和EcoRⅠ為兩種限制酶。請分析回答：
（1）催化過程①的酶有 反轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶反轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶，RT-PCR的進行應(yīng)先設(shè)計針對PrM基因的特異性引物，下列可作為該過程的一對引物是 P1和P4P1和P4。
P1：5'TTGGATCCATGGAAGGCTCAATCATGTG3'
P2：5'CACAAGCTTAGATGACGTATCCAAGGAG3'
P3：5'TACGGTACCTTAGGGGTTAAGTGGG3'
P4：5'GCGAATTCTAACTGTAAGCCGGAGCG3'
（2）過程②在 DNA連接DNA連接酶的作用下可形成重組轉(zhuǎn)移載體，研究人員通過BamHⅠ和EcoRⅠ雙酶切后再電泳的方法進行重組轉(zhuǎn)移載體的鑒定篩選，請在圖2中畫出通用轉(zhuǎn)移載體和重組轉(zhuǎn)移載體酶切并電泳后條帶的大致位置。
（3）研究發(fā)現(xiàn)，偽狂犬病毒在細胞中增殖的非必需基因占病毒基因組的一半以上，因此，以該病毒為載體的優(yōu)勢體現(xiàn)在 插入外源基因的區(qū)域多而不影響其本身的繁殖插入外源基因的區(qū)域多而不影響其本身的繁殖，過程③采用脂質(zhì)體介導共轉(zhuǎn)染PK-15細胞的原理是 細胞質(zhì)膜的流動性細胞質(zhì)膜的流動性。
（4）偽狂犬病毒缺失TK、gG等基因會顯著降低毒力，但不會影響自身正常繁殖，故重組病毒理論上具有的特點是 能侵染宿主細胞但不具有致病性能侵染宿主細胞但不具有致病性，若檢測重組病毒中PrM基因是否成功表達，可采用的方法是 抗原—抗體雜交抗原—抗體雜交。
（5）該重組病毒能否直接作為基因工程疫苗投入使用，還需要進一步探究。請你利用所學的知識簡要寫出實驗設(shè)計思路：給多只健康且生理狀態(tài)相同的豬接種一定劑量的重組病毒，定期觀察其生長情況并檢測血漿中相應(yīng)的抗體水平給多只健康且生理狀態(tài)相同的豬接種一定劑量的重組病毒，定期觀察其生長情況并檢測血漿中相應(yīng)的抗體水平。
【答案】反轉(zhuǎn)錄酶、Taq酶；P1和P4；DNA連接；插入外源基因的區(qū)域多而不影響其本身的繁殖；細胞質(zhì)膜的流動性；能侵染宿主細胞但不具有致病性；抗原—抗體雜交；給多只健康且生理狀態(tài)相同的豬接種一定劑量的重組病毒，定期觀察其生長情況并檢測血漿中相應(yīng)的抗體水平
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/7 8:0:9組卷：19引用：1難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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