科研人員利用多種途徑研制了抗新冠病毒的單克隆抗體,圖甲是抗新冠病毒單克隆抗體的制備示意圖。已知正常細(xì)胞(包括B細(xì)胞)內(nèi)DNA合成途徑包括正常途徑和補救途徑,甲氨蝶呤(A)能阻斷DNA的正常合成途徑;補救途徑則是利用從環(huán)境中獲取的次黃嘌呤(H)和胸腺嘧啶核苷(T),經(jīng)激酶或轉(zhuǎn)化酶的催化合成DNA(如圖乙所示),而骨髓瘤細(xì)胞缺失補救途徑的激酶或轉(zhuǎn)化酶。據(jù)此回答下列問題:
(1)①過程需要用到
PEG(聚乙二醇)
PEG(聚乙二醇)
(化學(xué)物質(zhì))促進細(xì)胞融合。
(2)若只考慮①過程中細(xì)胞的兩兩融合,②過程中需要進行細(xì)胞篩選(B細(xì)胞和B細(xì)胞融合的B-B細(xì)胞由于不能增殖,不用對其篩選;瘤細(xì)胞和瘤細(xì)胞融合的瘤—瘤細(xì)胞具有增殖能力需要淘汰)。根據(jù)DNA合成途徑制備雜交瘤細(xì)胞的選擇培養(yǎng)基,應(yīng)該在普通動物細(xì)胞培養(yǎng)基中加入 甲氨蝶呤(A)、次黃嘌呤(H)和胸腺嘧啶核苷(T)
甲氨蝶呤(A)、次黃嘌呤(H)和胸腺嘧啶核苷(T)
,該培養(yǎng)基能起到選擇作用的機理是 普通動物細(xì)胞培養(yǎng)基中加入甲氨蝶呤阻斷瘤—瘤細(xì)胞中的DNA合成途徑,使其無法增殖。而加入次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷能夠使雜交瘤細(xì)胞中DNA補救途徑發(fā)揮作用而存活
普通動物細(xì)胞培養(yǎng)基中加入甲氨蝶呤阻斷瘤—瘤細(xì)胞中的DNA合成途徑,使其無法增殖。而加入次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷能夠使雜交瘤細(xì)胞中DNA補救途徑發(fā)揮作用而存活
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(3)④和⑤過程分別需要 逆轉(zhuǎn)錄酶、限制酶和DNA連接
逆轉(zhuǎn)錄酶、限制酶和DNA連接
酶。⑥過程需要用CaCl2處理大腸桿菌使之處于 感受態(tài)
感受態(tài)
,有利于將抗體合成基因?qū)氪竽c桿菌。將抗體合成基因?qū)氪竽c桿菌并使之穩(wěn)定表達的過程,稱之為 轉(zhuǎn)化
轉(zhuǎn)化
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(4)抗新冠病毒單抗與普通的抗新冠病毒抗體相比,優(yōu)點是 特異性強、靈敏度高,并可以大量制備
特異性強、靈敏度高,并可以大量制備
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