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試題詳情
安莎霉素是一類主要由海洋來源的稀有放線菌產(chǎn)生的活性大環(huán)內(nèi)酰胺類次級代謝產(chǎn)物，具有較高的抗菌活性和藥用價值?？蒲腥藛T通常從深海采集淤泥樣本，再分離、純化并篩選出產(chǎn)安莎霉素的放線菌。一株海洋來源的稀有放線菌的分離培養(yǎng)流程如圖甲所示。請分析回答下列問題：
（1）過程①的接種方法為稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法。
（2）統(tǒng)計菌落種類和數(shù)量時要每隔24h觀察統(tǒng)計一次，直到各類菌落數(shù)目穩(wěn)定，以防止培養(yǎng)時間不足導(dǎo)致遺漏菌落的種類和數(shù)目遺漏菌落的種類和數(shù)目，或培養(yǎng)時間太長導(dǎo)致菌落粘連影響計數(shù)、培養(yǎng)基表面干燥脫水菌落粘連影響計數(shù)、培養(yǎng)基表面干燥脫水。
（3）研究人員發(fā)現(xiàn)產(chǎn)安莎霉素的放線菌具有一個普遍的共性--氨基酸缺陷型，從培養(yǎng)基成分分析，基本培養(yǎng)基與完全培養(yǎng)基存在差異的成分是氨基酸氨基酸。為了初步鑒定營養(yǎng)缺陷型放線菌菌株，科研人員進(jìn)行了如下操作：
①用接種針挑取菌落A菌落A（填“菌落A”或“菌落B”）接種于盛有完全液體培養(yǎng)基的離心管中，28℃振蕩培養(yǎng)3～5天后，離心取沉淀物，用無菌水洗滌3次制成菌懸液。
②吸取1mL菌懸液加入無菌培養(yǎng)皿中，傾注15mL融化并冷卻至50℃左右的基本培養(yǎng)基，待其冷凝后用記號筆在皿底皿底（“皿蓋”或“皿底”）劃分五個區(qū)域，標(biāo)記A、B、C、D、E。
③在劃分的五個區(qū)域上放入少量分組的氨基酸粉末（如下表所示），經(jīng)培養(yǎng)后，觀察生長圈出現(xiàn)的區(qū)域，從而確定屬于何種氨基酸缺陷型。
| 組別 | 所含氨基酸 | ||||
| A | 組氨酸 | 蘇氨酸 | 谷氨酸 | 天冬氨酸 | 亮氨酸 |
| B | 精氨酸 | 蘇氨酸 | 賴氨酸 | 甲硫氨酸 | 苯丙氨酸 |
| C | 酪氨酸 | 谷氨酸 | 賴氨酸 | 色氨酸 | 丙氨酸 |
| D | 甘氨酸 | 天冬氨酸 | 甲硫氨酸 | 色氨酸 | 絲氨酸 |
| E | 半胱氨酸 | 亮氨酸 | 苯丙氨酸 | 丙氨酸 | 絲氨酸 |
天冬氨酸
天冬氨酸
缺陷型。（4）科研人員分離、純化出產(chǎn)安莎霉素的放線菌后，需要利用PCR技術(shù)大量擴(kuò)增其染色體上的16SrRNA保守片段，然后通過DNA序列比對進(jìn)行菌種親緣關(guān)系的鑒定。
①查找數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)該放線菌的16SrRNA目的基因片段及相應(yīng)限制酶識別序列如圖乙所示：
| 限制酶 | EcoRⅠ | BamHⅠ | HindⅢ | SacⅠ |
| 識別序列和切割位點(diǎn) | G↓AATTCG | G↓ATCC | A↓AGCTT | GAGCT↓C |
EcoRⅠ
EcoRⅠ
和SacⅠ
SacⅠ
。得到目的基因以后就可以利用PCR技術(shù)對16SrRNA進(jìn)行體外擴(kuò)增，此過程需要加入Taq酶
Taq酶
催化。②聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對引物的特異性要求較高，放線菌是一類GC含量高的細(xì)菌，設(shè)定退火溫度時需要適當(dāng)
升高
升高
（填“升高”或“降低”）溫度，為了摸索出最適退火溫度，設(shè)定了55℃、56℃、57℃、58℃四個溫度梯度，反應(yīng)結(jié)束后，電泳檢測PCR產(chǎn)物（已知16SrRNA片段大小為1500dp），不同溫度對應(yīng)的結(jié)果如圖丙所示，1～4四個泳道中退火溫度較高的是A
A
。A．55℃、56℃、57℃、58℃
B．56℃、55℃、58℃、57℃
C．58℃、57℃、56℃、55℃
D．55℃、58℃、56℃、57℃
【考點(diǎn)】微生物的選擇培養(yǎng)（稀釋涂布平板法）；基因工程的操作過程綜合．
【答案】稀釋涂布平板法；遺漏菌落的種類和數(shù)目；菌落粘連影響計數(shù)、培養(yǎng)基表面干燥脫水；氨基酸；菌落A；皿底；天冬氨酸；EcoRⅠ；SacⅠ；Taq酶；升高；A
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：11引用：1難度：0.6
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1．丙草胺（C15H22ClNO2）是一種廣泛應(yīng)用的除草劑，能抑制土壤細(xì)菌、放線菌和真菌的生長。某研究小組從某地土壤中分離獲得能有效降解丙草胺的細(xì)菌菌株，并對其計數(shù)（如圖所示），以期為修復(fù)污染土壤提供微生物資源。下列敘述錯誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 4:0:1組卷：17引用：3難度：0.7 -
2．回答下列關(guān)于微生物的問題．
阿拉伯膠是一種多糖，研究者從某地合歡樹下距離地表深10～15cm處的土樣中初篩到能合成阿拉伯膠降解酶的菌株SM01，以下為該菌株的鑒定過程．
（1）為獲得單菌落，可采用平板劃線法或法將初篩菌液接種在培養(yǎng)基上．46SM01菌落為粉白色，初期呈突起絮狀，在顯微鏡下觀察到，菌絲白色致密，且有分生孢子，細(xì)胞核直徑約1μm,初步推測為真菌，則其特征中，最能說明SM01是真菌的是有細(xì)胞核，且有分生孢子．SM01還一定具有的結(jié)構(gòu)有（多選）．
A．細(xì)胞膜 B．核糖體 C．?dāng)M核 D．莢膜
（2）表中培養(yǎng)液pH均為6.0，若對SM01中阿拉伯膠降解酶的活力進(jìn)行測定，則應(yīng)選用表中的培養(yǎng)液，針對不選用的其他培養(yǎng)液，分別說明原因：
①缺少，SM01不能很好生長
②具有，會影響對SM01自身產(chǎn)生的酶活力的測定結(jié)果
③缺乏，會影響SM01的生長，也無法對阿拉伯膠酶活力進(jìn)行測定．
表 試驗用培養(yǎng)液配方培養(yǎng)液 阿拉伯膠 阿拉伯膠酶 NaNO3 牛肉膏 K2SOPO4 MgSO4?7H2O KCl FeSO4?7H2O
A
25g/L__ __ __
g/L
g/L
g/Lg/L B
25g/L
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L
g/LC __ __
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/LD
25g/L__
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L發(fā)布：2025/1/2 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.5 -
3．為了防治大氣污染，煙氣脫硫是環(huán)保領(lǐng)域迫切需要解決的問題．研究人員為了獲得用于煙氣脫硫的脫硫細(xì)菌，并了解其生長規(guī)律，進(jìn)行了如下操作．請回答下列問題：
（1）采樣與細(xì)菌的篩選：在某熱電廠煙囪周圍區(qū)域要盡量做到采集土樣．為確保能夠從樣品中分離到所需要的煙氣脫硫細(xì)菌，可以通過增加脫硫菌的濃度．
（2）馴化脫硫細(xì)菌：將篩選出的脫硫細(xì)菌接種于有少量無菌水的三角瓶中，邊攪拌邊持續(xù)通入SO2氣體幾分鐘，然后接種到培養(yǎng)基上，待長出菌落后再重復(fù)上述步驟，并逐步延長通SO2的時間，同時逐步降低培養(yǎng)基的pH．此操作的目的是分離出的脫硫細(xì)菌．
（3）培養(yǎng)與觀察：一般來說，在一定的培養(yǎng)條件下（相同的培養(yǎng)基、溫度及培養(yǎng)時間），馴化后的脫硫細(xì)菌表現(xiàn)出穩(wěn)定的特征．用高倍顯微鏡（填“可以”或“不可以”）觀察到脫硫細(xì)菌的核糖體．
（4）探究生長規(guī)律：在計數(shù)時，計數(shù)方法有稀釋涂布平板法和直接計數(shù)法．在用稀釋涂布平板法進(jìn)行計數(shù)時，當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的；通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌，通常推測統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目．發(fā)布：2025/1/1 8:0:2組卷：6引用：2難度：0.5