當(dāng)前新冠病毒的主要檢測手段有核酸檢測法和免疫學(xué)檢測法。請回答下列問題:
(1)核酸檢測方法:目前,新冠病毒的實(shí)驗(yàn)室檢測主要依賴核酸檢測,包括以下兩種方法:
①全基因組測序:病原體宏基因組測序(mNGS)是目前臨床實(shí)踐中最常用的病原體基因測序方法。mNGS技術(shù)首先需要將病毒RNA制備成測序儀可以識別和分析的DNA文庫,需要將RNA
反轉(zhuǎn)錄
反轉(zhuǎn)錄
產(chǎn)生的多種互補(bǔ)DNA片段,與 載體
載體
連接后儲存在 受體菌
受體菌
中。然后使用測序儀對核酸序列進(jìn)行檢測。檢測結(jié)果經(jīng)生物信息學(xué)軟件處理,最終展現(xiàn)出與病毒序列相關(guān)的信息。
②熒光PCR法:在常規(guī)PCR檢測的基礎(chǔ)上加入了熒光物質(zhì),通過監(jiān)測發(fā)光信號來進(jìn)行分析的一種方法。PCR利用 DNA(雙鏈)復(fù)制
DNA(雙鏈)復(fù)制
的原理,實(shí)現(xiàn)目的基因的擴(kuò)增,該過程首先需要設(shè)計(jì)引物,國家微生物科學(xué)數(shù)據(jù)中心公布了新冠病毒S蛋白的引物序列,已知其中一段引物的序列為CCCAACTTCTCCTCCTAGAAT,能否根據(jù)該引物序列設(shè)計(jì)出另一段引物的序列?不能
不能
(填“能”或“不能”),原因是 DNA雙鏈?zhǔn)欠聪蚱叫械模瑥?fù)制時每條鏈的延伸方向都是5’-3’,該引物只能結(jié)合一條鏈的一端,無法據(jù)此確定另一引物的堿基序列(已知一端引物的堿基序列無法推斷另一端引物的堿基序列)
DNA雙鏈?zhǔn)欠聪蚱叫械?,?fù)制時每條鏈的延伸方向都是5’-3’,該引物只能結(jié)合一條鏈的一端,無法據(jù)此確定另一引物的堿基序列(已知一端引物的堿基序列無法推斷另一端引物的堿基序列)
。目前在PCR反應(yīng)中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是 Taq酶熱穩(wěn)定性高,而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活
Taq酶熱穩(wěn)定性高,而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活
。TaqMan是最為常用的一種具有熒光標(biāo)記的核酸探針,能與目標(biāo)基因特異性結(jié)合,利用原理是 堿基互補(bǔ)配對原則
堿基互補(bǔ)配對原則
。
(2)免疫學(xué)檢測法:該技術(shù)基于血清中抗原和抗體的特異性結(jié)合進(jìn)行檢測。
①制備抗體:可以用到單克隆抗體的相關(guān)技術(shù),其過程是取產(chǎn)生免疫反應(yīng)的 脾(B淋巴)
脾(B淋巴)
細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞混合培養(yǎng),使其融合,最后篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞,雜交瘤細(xì)胞可以在體外進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)或注射到 小鼠腹腔內(nèi)
小鼠腹腔內(nèi)
,雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)液中需要特殊的成分,通常需要加入 血清、血漿
血清、血漿
等一些天然成分。
②制備抗原:對新冠病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白基因進(jìn)行擴(kuò)增與克隆,構(gòu)建基因的 表達(dá)載體
表達(dá)載體
,導(dǎo)入大腸桿菌得到大量相關(guān)蛋白,純化后就可以作為抗原進(jìn)行檢測。