從自然界中的生物體內分離得到的天然酶，在工業(yè)生產環(huán)境中催化效率往往較低?？蒲腥藛T對酶的改造包括理性設計方法和非理性設計方法。
（1）理性設計是通過定點誘變改變蛋白質中的個別氨基酸，以產生更加理想的酶，此項技術稱為 蛋白質工程蛋白質工程。
（2）非理性設計方法主要通過易錯PCR技術實現。易錯PCR的原理是利用低保真的TaqDNA聚合酶和改變PCR的反應條件，降低DNA復制的保真度，在新DNA鏈的合成過程中增加堿基錯配，從而使擴增產物出現較多點突變的一種體外誘導DNA序列變異的方法。
①TaqDNA聚合酶與一般DNA聚合酶相比最大的特點是 高溫下能保持活性或耐高溫高溫下能保持活性或耐高溫，其某一區(qū)域負責將堿基與模板鏈正確地互補配對，Mn2+可以降低這一功能，提高堿基的錯配，但非互補的堿基對由于 氫鍵氫鍵不易形成，穩(wěn)定性差，而Mg2+可以提高穩(wěn)定性，易錯PCR時應適當 提高提高（填“提高”或“降低”）Mg2+濃度。
②易錯PCR的反應程序為：95℃5min；95℃30s,55℃30s,72℃1min,30個循環(huán)；72℃10min。在循環(huán)之前的95℃5min處理為預變性，目的是確保 DNA分子充分（完全、徹底）變性DNA分子充分（完全、徹底）變性；循環(huán)中55℃處理的目的是使 引物與模板引物與模板結合；循環(huán)之后72℃處理時間延長至10min,有利于增加延伸過程中堿基錯配的概率。
③如圖是利用易錯PCR改造某種天然酶活性的流程示意圖。構建重組質粒所需要的酶是 限制酶（限制性內切核酸酶）和DNA連接酶限制酶（限制性內切核酸酶）和DNA連接酶。
④步驟b應使用 Cacl2（或Ca2+）Cacl2（或Ca2+）（化學試劑）使受體菌處于 感受感受態(tài)；步驟c采用 抗原-抗體雜交抗原-抗體雜交技術篩選突變酶；步驟d將一輪易錯PCR篩選獲得的有益突變繼續(xù)進行新一輪的易錯PCR，通過連續(xù)易錯PCR和篩選，導致酶的 定向定向進化，以獲得滿足人們需求的產物。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】蛋白質工程；高溫下能保持活性或耐高溫；氫鍵；提高；DNA分子充分（完全、徹底）變性；引物與模板；限制酶（限制性內切核酸酶）和DNA連接酶；Cacl2（或Ca2+）；感受；抗原-抗體雜交；定向
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：6引用：1難度：0.7
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1．數字PCR技術是一種核酸分子絕對定量技術，其原理如圖所示。下列有關敘述正確的是（ ?。?img alt src="http://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：7難度：0.6 -
2．科學家為了提高光合作用過程中Rubiaco酶對CO2的親和力，利用PCR定點突變技術改造Rubisco酶基因，從而顯著提高了植物的光合作用速率。請回答下列問題：
（1）PCR定點突變技術屬于（填“基因工程”或“蛋白質工程”）。可利用定點突變的DNA構建基因表達載體，常用將基因表達載體導入植物細胞，還需用到植物細胞工程中的技術，才能最終獲得轉基因植物。
（2）PCR過程所依據的原理是。利用PCR技術擴增，若將一個目的基因復制10次，則需要在緩沖液中至少加入個引物。
（3）目的基因進入受體細胞內，并在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程稱為?？蒲腥藛T通過實驗研究發(fā)現培育的該轉基因植株的光合作用速率并未明顯增大，可能的原因是。
（4）另有一些科學家利用生物技術將人的生長激素基因導入小鼠受精卵的細胞核中，經培育獲得一種轉基因小鼠，其膀胱上皮細胞可以合成人的生長激素并分泌到尿液中。有關敘述錯誤的是。
A．選擇受精卵作為外源基因的受體細胞是因為這種細胞的全能性最容易表達
B．采用DNA分子雜交技術可檢測外源基因在小鼠細胞內是否成功表達
C．人的生長激素基因能在小鼠細胞表達，說明遺傳密碼在不同種生物中可以通用
D．將轉基因小鼠體細胞進行核移植（克?。?，可以獲得多個具有外源基因的后代發(fā)布：2025/1/16 8:0:1組卷：14引用：2難度：0.6 -
3．下列關于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7