人類γ-干擾素是由γ基因編碼的一類分泌蛋白，在免疫系統(tǒng)和腫瘤性疾病治療方面應(yīng)用廣泛。然而，自然干擾素來源有限，不能滿足科研和臨床應(yīng)用的需要。為了實(shí)現(xiàn)人類γ-干擾素的工廠化生產(chǎn)，科研人員期望利用A基因（在真核細(xì)胞中廣泛表達(dá)的一種基因）上游的調(diào)控序列（序列內(nèi)存在XhoⅠ和MunⅠ兩個(gè)酶切位點(diǎn)，XhoⅠ距上游引物F1為318bp和MunⅠ距γ基因下游引物R為54bp）驅(qū)動(dòng)γ基因表達(dá)，因此科研人員擴(kuò)增了A基因上游的這段調(diào)控序列并將其插入表達(dá)載體質(zhì)粒中（該載體已事先插入了γ基因的編碼序列，且含有新霉素抗性基因，不同酶切位點(diǎn)之間的距離如圖），并將重組質(zhì)粒導(dǎo)入到酵母菌中，利用發(fā)酵技術(shù)工業(yè)化生產(chǎn)人類γ-干擾素。相關(guān)信息如圖所示。

（1）為將A基因上游完整的調(diào)控序列擴(kuò)增后的產(chǎn)物定向插入載體指導(dǎo)人類γ基因表達(dá)，需在引物末端添加限制酶識(shí)別序列。據(jù)圖可知，在F1和R末端添加的序列所對(duì)應(yīng)的限制酶分別是

Sal I和EcoR I

Sal I和EcoR I

，表達(dá)載體上新霉素基因的作用是

為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來

為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來

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（2）為了檢驗(yàn)A基因上游的調(diào)控序列是否成功插入表達(dá)載體中，科研人員利用限制酶MunⅠ和EcoRⅠ對(duì)表達(dá)載體進(jìn)行酶切后電泳檢測(cè)，若酶切后電泳中出現(xiàn)

246

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bp左右大小的條帶，則說明A基因上游的調(diào)控序列已成功插入表達(dá)載體。
（3）在篩選過程中，應(yīng)該選擇不含新霉素抗性基因的酵母菌作為受體細(xì)胞，以便在加入新霉素的選擇培養(yǎng)基中篩選出導(dǎo)入質(zhì)粒的酵母菌，但篩選出的酵母菌菌落并非都是目的菌株，原因是

在構(gòu)建基因的表達(dá)載體時(shí)，有些質(zhì)粒pCLY11未與目的片段結(jié)合，被導(dǎo)入酵母菌后導(dǎo)致其具有新霉素抗性

在構(gòu)建基因的表達(dá)載體時(shí)，有些質(zhì)粒pCLY11未與目的片段結(jié)合，被導(dǎo)入酵母菌后導(dǎo)致其具有新霉素抗性

。在基因工程的基本操作過程中，最核心步驟的目的是

使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且遺傳給下一代

使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且遺傳給下一代

。在工業(yè)生產(chǎn)過程中，使用酵母菌作為受體，而不選用大腸桿菌的原因是

γ-干擾素是一類真核細(xì)胞的分泌蛋白，大腸桿菌不含內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，不能對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行加工和修飾

γ-干擾素是一類真核細(xì)胞的分泌蛋白，大腸桿菌不含內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，不能對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行加工和修飾

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