人類酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（aFGF）在轉(zhuǎn)基因植物中的表達(dá)量普遍較低，某科研小組通過(guò)添加增強(qiáng)子（增強(qiáng)它所調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄頻率）、polyA序列（提高mRNA的穩(wěn)定性）等表達(dá)控制元件提高了aFGF基因在紫花苜蓿細(xì)胞中的表達(dá)量。如圖表示操作的基本過(guò)程，質(zhì)粒外面標(biāo)注了限制酶酶切位點(diǎn)，質(zhì)粒里面標(biāo)注了相關(guān)的結(jié)構(gòu)和基因（其中Kan^r代表卡那霉素抗性基因）。請(qǐng)回答問(wèn)題。

（1）①②過(guò)程構(gòu)建重組質(zhì)粒都需要使用限制酶和

DNA連接酶

DNA連接酶

，限制酶酶XhoⅠ的識(shí)別序列是一C↓TCGAG-，aFGF基因被限制酶XhoⅠ切割后形成的黏性末端是

。
（2）圖中質(zhì)粒均未標(biāo)出

aFGF基因兩端的堿基序列

aFGF基因兩端的堿基序列

復(fù)制原點(diǎn)（填結(jié)構(gòu)名稱）；X、Y、Z三個(gè)酶切位點(diǎn)中，

Z

Z

的酶切位點(diǎn)與其他兩點(diǎn)不同。
（3）③過(guò)程用

Ca²⁺

Ca²⁺

預(yù)先處理農(nóng)桿菌，可提高質(zhì)粒4的導(dǎo)入率；進(jìn)行④過(guò)程前，需提取農(nóng)桿菌DNA，通過(guò)PCR進(jìn)行基因擴(kuò)增，鑒定其是否含目的基因，其設(shè)計(jì)引物的依據(jù)是

aFGF基因兩端的堿基序列

aFGF基因兩端的堿基序列

。
（4）轉(zhuǎn)化后的紫花苜蓿外植體需經(jīng)過(guò)

脫分化、再分化

脫分化、再分化

過(guò)程才能長(zhǎng)成完整植株，若長(zhǎng)大后的轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿的aFGF表達(dá)量明顯提高，請(qǐng)分析原因：

增強(qiáng)子提高了aFGF基因轉(zhuǎn)錄的頻率，植物偏好的密碼子合成的aFGF基因及polyA序列提高了翻譯的效率

增強(qiáng)子提高了aFGF基因轉(zhuǎn)錄的頻率，植物偏好的密碼子合成的aFGF基因及polyA序列提高了翻譯的效率

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