人呼吸道合胞病毒（HRSV）是一種單鏈RNA病毒，如圖是構(gòu)建人呼吸道合胞病毒基因組載體的示意圖，下表是相關(guān)限制酶的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)，請(qǐng)回答：

限制酶	BclⅠ	EcoRⅠ	XbaⅠ	Sau3AⅠ	BamHⅠ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)	T↓GATCA	G↓AATTC	T↓CTAOA	↓GATC	G↓GATCC

（1）HRSV的基因組為-RNA，入侵細(xì)胞后在

RNA復(fù)制酶

RNA復(fù)制酶

的催化下合成+RNA．
（2）過程②設(shè)計(jì)引物時(shí)在兩種引物的5′端分別添加

XbaⅠ

XbaⅠ

、

Sau3AⅠ

Sau3AⅠ

酶的識(shí)別序列。過程③需要用

XbaⅠ

XbaⅠ

、

Sau3AⅠ

Sau3AⅠ

酶切割質(zhì)粒A。
（3）過程④將質(zhì)粒B導(dǎo)入大腸桿菌，有利于

擴(kuò)增重組DNA分子，用于下一步的抗性檢測(cè)

擴(kuò)增重組DNA分子，用于下一步的抗性檢測(cè)

，需要用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理大腸桿菌。
（4）為制備減毒突變株，科研人員將單個(gè)突變堿基引入HRSV基因組cDNA質(zhì)粒克隆中，流程如圖。已知在細(xì)菌體內(nèi)合成的DNA分子有甲基化修飾，通過PCR擴(kuò)增的DNA鏈無甲基化修飾。

①DpnⅠ識(shí)別甲基化的GATC四個(gè)堿基序列，因此其能將

原來的a、b鏈

原來的a、b鏈

水解消化掉。在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)完成缺刻修復(fù)需要

DNA連接

DNA連接

酶。
②已知質(zhì)粒B為a個(gè)，經(jīng)過程①擴(kuò)增15個(gè)循環(huán)，需要突變引物

15a

15a

個(gè)，將過程②形成的產(chǎn)物全部轉(zhuǎn)入大腸桿菌后復(fù)制n輪，得到雙鏈突變的DNA

15a×2^n-1

15a×2^n-1

個(gè)。