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In-Fusion技術(shù)是一項新型的無縫克隆技術(shù)。該技術(shù)關(guān)鍵是要在目的基因兩端構(gòu)建與線性化質(zhì)粒末端相同的DNA序列（即同源序列，通常為15-20bp），然后用In-Fusion 酶處理即可實(shí)現(xiàn)無縫連接。它的操作步驟大致為：①質(zhì)粒線性化；②PCR擴(kuò)增出兩端含線性化質(zhì)粒同源序列的目的基因；③目的基因與線性化質(zhì)粒同源區(qū)域在In-Fusion酶作用下形成重組質(zhì)粒；④將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞。
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（1）過程①中需要用到的酶有
TaqDNA聚合酶
TaqDNA聚合酶
。另外，利用
限制酶
限制酶
處理也可以直接得到線性化質(zhì)粒。
（2）據(jù)圖分析，為保證擴(kuò)增出所需的目的基因，引物A或引物B要依據(jù)
目的基因和質(zhì)粒
目的基因和質(zhì)粒
序列進(jìn)行設(shè)計。過程②經(jīng)過
3
3
輪循環(huán)即可初步得到符合要求的目的基因片段。
（3）過程③中，同源序列1、2中的堿基排序不同，這樣設(shè)計的好處是
防止目的基因反向連接；防止線性化質(zhì)粒或目的基因的自身環(huán)化
防止目的基因反向連接；防止線性化質(zhì)?；蚰康幕虻淖陨憝h(huán)化
。圖示In-Fusion技術(shù)可作為模型使用，一般來說只需要改變圖中的
引物A和引物B
引物A和引物B
，即可快速構(gòu)建出另一種目的基因的重組質(zhì)粒。
（4）若目的基因是氨芐青霉素抗性基因，以大腸桿菌作為受體細(xì)胞時，過程④需要用
Ca2+
Ca2+
處理大腸桿菌。為檢測已轉(zhuǎn)化大腸桿菌的抗性效果，在含氨芐青霉素的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間后，分別用顯微鏡計數(shù)法和
稀釋涂布平板
稀釋涂布平板
法進(jìn)行計數(shù)，若計數(shù)結(jié)果分別是M、N，則致死率可用（ M-N）/Mx 100%表示，此結(jié)果較真實(shí)值偏大，原因是
在用稀釋涂布平板法計數(shù)時，當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落
在用稀釋涂布平板法計數(shù)時，當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落
。

【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】TaqDNA聚合酶；限制酶；目的基因和質(zhì)粒；3；防止目的基因反向連接；防止線性化質(zhì)?；蚰康幕虻淖陨憝h(huán)化；引物A和引物B；Ca2+；稀釋涂布平板；在用稀釋涂布平板法計數(shù)時，當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，在平板上觀察到的是一個菌落
【解答】
【點(diǎn)評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：29引用：1難度：0.6
相似題

  • 1．某科研小組從土壤菌株A、B中分離到同源性為93%的Bt1抗蟲基因和Bt2抗蟲基因的編碼序列，并運(yùn)用交錯延伸PCR技術(shù)獲得了抗蟲性能強(qiáng)的重組B基因，轉(zhuǎn)入煙草獲得成功，過程如圖所示。下列選項正確的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)
    注：①交錯延伸PCR：基因Bt1和Bt2均作為模板，所需引物相同，圖中僅示其中一條鏈的延伸情況。②啟動子Pr1a可在煙草葉肉細(xì)胞中特異性啟動基因的轉(zhuǎn)錄。③圖中生長素合成酶基因是通過成熟mRNA逆轉(zhuǎn)錄獲得的DNA片段，可使植物細(xì)胞合成生長素。

    發(fā)布：2024/11/16 21:0:1組卷：36引用：2難度：0.5

  • 2．基因工程在農(nóng)牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生和食品工業(yè)等多方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，如圖表示利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)人血清白蛋白的兩條途徑。下列敘述錯誤的是（　?。?br />菁優(yōu)網(wǎng)

    發(fā)布：2024/11/14 7:0:1組卷：62引用：7難度：0.7

  • 3．經(jīng)由食物攝取過量生物胺會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應(yīng)，嚴(yán)重時甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進(jìn)行減控。微生物來源的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，基于基因工程規(guī)?；a(chǎn)重組MCO在食品工業(yè)中具有廣泛用途。我國科研人員采用PCR技術(shù)獲得發(fā)酵乳桿菌的MCO基因，然后轉(zhuǎn)入大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá)。
    （1）通過上述基因工程技術(shù)獲取目標(biāo)產(chǎn)物，涉及如下步驟，則合理的操作步驟排序是
     
    （填寫下列編號）。
    ①篩選和鑒定含目的基因的受體細(xì)胞
    ②選用合適的方法獲取目的基因
    ③借助發(fā)酵工程規(guī)模化生產(chǎn)目標(biāo)蛋白
    ④目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞
    ⑤目的基因和運(yùn)載體重組構(gòu)建表達(dá)載體
    （2）在PCR過程中，引物的功能是
     
    。
    A．啟動DNA復(fù)制
    B．規(guī)定擴(kuò)增區(qū)間
    C．解旋DNA雙鏈
    D．充當(dāng)復(fù)制模板
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    （3）為獲得目的基因MCO（圖甲灰色表示的序列），正確設(shè)計的PCR引物應(yīng)為圖甲中的
     
    。
    （4）獲取目的基因后，需要和載體重組導(dǎo)入受體細(xì)胞。載體的化學(xué)本質(zhì)是
     
    （填DNA或RNA/DNA或RNA）。
    （5）在常規(guī)PCR的每一輪擴(kuò)增反應(yīng)中，溫度隨時間的變化順序是圖乙中的
     
    。
    （6）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈圖丙中圖2所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15（圖丙中圖1）需用
     
    和
     
    切開，才能與MCO片段高效連接。
    （7）下列實(shí)驗操作中，能有效鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”的是
     
    。
    A．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，用合適的限制酶切割
    B．在選擇培養(yǎng)基中添加X-gal試劑，以克隆的顏色進(jìn)行鑒別
    C．從抗藥性克隆中提取質(zhì)粒DNA，以此為模板進(jìn)行PCR檢測
    D．將Ap抗性克隆轉(zhuǎn)移至含Tc（四環(huán)素）的平板上，根據(jù)大腸桿菌生長與否加以鑒別

    發(fā)布：2024/11/14 4:30:2組卷：29引用：3難度：0.5
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