金屬硫蛋白（MT）是一類廣泛存在的金屬結(jié)合蛋白，某研究小組計劃通過多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴增獲得目的基因，構(gòu)建轉(zhuǎn)基因工程菌，用于重金屬廢水的凈化處理。PCR擴增過程示意圖如圖，請回答下列問題：
（1）從高表達MT 蛋白的生物組織中提取mRNA，通過 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄獲得 cDNAcDNA用于PCR擴增。
（2）設(shè)計一對與MT基因兩端序列互補配對的引物（引物1和引物2），為方便構(gòu)建重組質(zhì)粒，在引物中需要增加適當(dāng)?shù)?限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶識別位點。設(shè)計引物時需要避免引物之間形成 堿基互補配對堿基互補配對，而造成引物自連。
（3）圖中步驟1代表 變性變性，步驟2代表退火，步驟3代表延伸，這三個步驟組成一輪循環(huán)。
（4）PCR擴增時，退火溫度的設(shè)定是成敗的關(guān)鍵。退火溫度過高會破壞 引物與模板引物與模板的堿基配對。退火溫度的設(shè)定與引物長度、堿基組成有關(guān)，長度相同但 GC含量高GC含量高的引物需要設(shè)定更高的退火溫度。
（5）如果PCR反應(yīng)得不到任何擴增產(chǎn)物，則可以采取的改進措施有 ②③②③（填序號：①升高退火溫度②降低退火溫度③重新設(shè)計引物）。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定；目的基因的篩選與獲取．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；cDNA；限制性核酸內(nèi)切酶；堿基互補配對；變性；引物與模板；GC含量高；②③
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：694引用：9難度：0.1
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1．科學(xué)家為了提高光合作用過程中Rubiaco酶對CO2的親和力，利用PCR定點突變技術(shù)改造Rubisco酶基因，從而顯著提高了植物的光合作用速率。請回答下列問題：
（1）PCR定點突變技術(shù)屬于（填“基因工程”或“蛋白質(zhì)工程”）?？衫枚c突變的DNA構(gòu)建基因表達載體，常用將基因表達載體導(dǎo)入植物細胞，還需用到植物細胞工程中的技術(shù)，才能最終獲得轉(zhuǎn)基因植物。
（2）PCR過程所依據(jù)的原理是。利用PCR技術(shù)擴增，若將一個目的基因復(fù)制10次，則需要在緩沖液中至少加入個引物。
（3）目的基因進入受體細胞內(nèi)，并在受體細胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達的過程稱為。科研人員通過實驗研究發(fā)現(xiàn)培育的該轉(zhuǎn)基因植株的光合作用速率并未明顯增大，可能的原因是。
（4）另有一些科學(xué)家利用生物技術(shù)將人的生長激素基因?qū)胄∈笫芫训募毎酥?，?jīng)培育獲得一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細胞可以合成人的生長激素并分泌到尿液中。有關(guān)敘述錯誤的是。
A．選擇受精卵作為外源基因的受體細胞是因為這種細胞的全能性最容易表達
B．采用DNA分子雜交技術(shù)可檢測外源基因在小鼠細胞內(nèi)是否成功表達
C．人的生長激素基因能在小鼠細胞表達，說明遺傳密碼在不同種生物中可以通用
D．將轉(zhuǎn)基因小鼠體細胞進行核移植（克?。梢垣@得多個具有外源基因的后代發(fā)布：2025/1/16 8:0:1組卷：14引用：2難度：0.6 -
2．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：7引用：2難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴增及其鑒定的說法錯誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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