科學(xué)工作者欲培育能產(chǎn)生含鐵量較高的轉(zhuǎn)基因花生新品種，Ti質(zhì)粒中含有潮霉素抗性基因，具體步驟如圖：
（1）完整的Ti質(zhì)粒除了圖示結(jié)構(gòu)外，還應(yīng)該包括啟動(dòng)子、終止子等，其中啟動(dòng)子位于基因的首段，它的作用是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄。
（2）若鐵結(jié)合蛋白基因來自菜豆，獲取該目的基因需要用到的工具酶的特點(diǎn)是能識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的脫氧核苷酸序列并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開能識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的脫氧核苷酸序列并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。
（3）圖中將目的基因（鐵結(jié)合蛋白基因）導(dǎo)入受體細(xì)胞的方法為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；為確定轉(zhuǎn)基因花生是否培育成功，首先應(yīng)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因花生的DNA上是否插入目的基因轉(zhuǎn)基因花生的DNA上是否插入目的基因，這是目的基因能否在受體細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵；其次，利用分子雜交法分子雜交法檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的mRNA；最后，利用抗原一抗體雜交法檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)。
（4）圖中用到的植物細(xì)胞工程技術(shù)是植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)，培養(yǎng)基1中經(jīng)過脫分化得到愈傷組織，培養(yǎng)基2中篩選的方法是在培養(yǎng)基中加入一定量的潮霉素潮霉素，培養(yǎng)基3的作用是誘導(dǎo)愈傷組織再分化誘導(dǎo)愈傷組織再分化。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄；能識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定的脫氧核苷酸序列并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開；農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；轉(zhuǎn)基因花生的DNA上是否插入目的基因；分子雜交法；植物組織培養(yǎng)；潮霉素；誘導(dǎo)愈傷組織再分化
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：19引用：1難度：0.6
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1．科研人員利用大腸桿菌構(gòu)建了抗蟲基因文庫。最新研究發(fā)現(xiàn)漏斗蜘蛛中的AH基因控制合成的毒素肽具有顯著的殺蟲效果，現(xiàn)以p-B質(zhì)粒為載體，構(gòu)建 AH基因的cDNA文庫。圖1表示p-B質(zhì)粒，其中Cm/表示氯霉素抗性基因，cdB 基因表達(dá)產(chǎn)物能抑制大腸桿菌 DNA 復(fù)制。圖中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，且不同種限制酶識(shí)別序列不同，其中AiuI、XbaI、SspI和MfeⅠ識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別是 AG'CT、T'CTAGA、AAT'ATT、C'AATTG。請(qǐng)分析并回答下列問題：
（1）為獲得AH基因的cDNA，先要從漏斗蜘蛛毒素肽分泌細(xì)胞中提取，再通過合成出AH基因的cDNA。若從漏斗蜘蛛其他組織細(xì)胞提取，則難以成功，原因是。
（2）若已知AH基因的cDNA兩端部分序列為：5'-AACTATGCGC……CGTAGCCTCT-3'，請(qǐng)寫出PCR擴(kuò)增該cDNA時(shí)的兩個(gè)引物對(duì)應(yīng)的局部序列（前10個(gè)堿基序列），并標(biāo)明5'和3'端：，。一個(gè)初始雙鏈cDNA經(jīng)四輪循環(huán)后，共消耗這兩種引物的數(shù)量為個(gè)。
（3）利用圖中的質(zhì)粒和AH基因構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，宜選用限制酶雙酶切質(zhì)粒，再選用限制酶切割目的基因，將切割后獲得的DNA片段混合，經(jīng)DNA連接酶處理后，再與大腸桿菌混合培養(yǎng)，在含有適量氯霉素的培養(yǎng)基中添加適量冷的，以促進(jìn)轉(zhuǎn)化。
（4）經(jīng)上述處理培養(yǎng)后，其中能繁殖的大腸桿菌中應(yīng)含有的質(zhì)粒是，原因是。發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：8引用：1難度：0.6 -
2．基因工程技術(shù)又稱為DNA重組技術(shù)，回答相關(guān)問題：
（1）在基因工程中，獲取目的基因主要有兩大途徑，即和從中分離．
（2）利用某植物的成熟葉片為材料，同時(shí)構(gòu)建cDNA文庫和基因組文庫，兩個(gè)文庫相比，cDNA文庫中含有的基因數(shù)目比基因組文庫中的少，其原因是．
（3）在基因表達(dá)載體中，啟動(dòng)子是聚合酶識(shí)別并結(jié)合的部位．若采用原核生物作為基因表達(dá)載體的受體細(xì)胞，最常用的原核生物是．
（4）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞時(shí)，采用最多的方法是法．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：2引用：1難度：0.3 -
3．基因治療是指將外源正常基因?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病，以達(dá)到治療的目的．干擾素基因缺失的小鼠不能產(chǎn)生成熟淋巴細(xì)胞，科研人員利用胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）對(duì)干擾素基因缺失的小鼠進(jìn)行了基因治療．請(qǐng)回答：
（1）為使干擾素基因在小鼠細(xì)胞中高效表達(dá)，需要把來自cDNA文庫的干擾素基因片段正確插入基因表達(dá)載體的和之間．
（2）將干擾素基因?qū)隕S細(xì)胞的方法是，采用可以鑒定目的基因是否插入到受體細(xì)胞染色體DNA分子上，再將能正常表達(dá)干擾素的細(xì)胞轉(zhuǎn)入到小鼠體內(nèi)，這種治療方法稱為．導(dǎo)入ES細(xì)胞而不是導(dǎo)入上皮細(xì)胞是因?yàn)镋S細(xì)胞在功能上具有．
（3）干擾素基因缺失的小鼠易患某種細(xì)菌導(dǎo)致的肺炎，引起這種現(xiàn)象的原因是小鼠缺少成熟的淋巴細(xì)胞，降低了小鼠免疫系統(tǒng)的功能．
（4）用于基因治療的基因有三類，一類是把正?；?qū)胗谢蛉毕莸募?xì)胞中，以表達(dá)出正常性狀來治療，第二類是反義基因，即通過產(chǎn)生的mRNA分子與病變基因產(chǎn)生的進(jìn)行互補(bǔ)結(jié)合，來阻斷非正常蛋白質(zhì)的合成；第三類是編碼可以殺死癌細(xì)胞的蛋白酶基因．發(fā)布：2024/12/29 8:0:2組卷：24引用：2難度：0.5
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