普通酵母菌利用淀粉的效率較低。研究人員將某海洋細菌中α-淀粉酶分子(B)基因轉入酵母菌中,經篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種。請回答下列問題:
(1)采用PCR技術擴增B基因。圖中箭頭表示一條引物結合模板的位置及擴增方向,請用箭頭在方框內標出另一條引物的位置及擴增方向。為使PCR產物能被限制酶切割,需在引物上添加相應的限制酶識別序列,該限制酶識別序列應添加在引物的 5'端5'端(3′端/5′端)。
(2)通常需提取大腸桿菌的質粒用來構建B基因的表達載體。提取的主要步驟是培養(yǎng)大腸桿菌→裂解菌體→質粒DNA的復性→離心提取→鑒定。在裂解菌體時需添加溶液(主要成分為EDTA)、溶液Ⅰ(主要成分為SDS),添加順序是先加 溶液Ⅰ溶液Ⅰ,5min后再加 溶液Ⅱ溶液Ⅱ。在所提取的質粒上還需添加 酵母菌酵母菌(海洋細菌/大腸桿菌/酵母菌)的啟動子、終止子等。
(3)在將B基因導入酵母細胞前,需先將酵母菌置于含醋酸鋰的培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時間,從而提高轉化效率。由此推測,醋酸鋰的培養(yǎng)液可用于制備 感受態(tài)酵母菌感受態(tài)酵母菌。
(4)用B抗體檢測該工程菌的培養(yǎng)物時,培養(yǎng)液無抗原抗體反應,菌體有抗原抗體反應。這為分離、純化B蛋白提供的啟示是 在用該工程菌進行工業(yè)發(fā)酵時,應從菌體中分離、純化B蛋白在用該工程菌進行工業(yè)發(fā)酵時,應從菌體中分離、純化B蛋白。以淀粉為原料,用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的適宜條件下密閉發(fā)酵,接種了工程酵母菌的發(fā)酵罐需要率先排氣,其原因是 工程酵母菌分解淀粉產生葡萄糖的能力強,導致酒精發(fā)酵產生CO2速率更快工程酵母菌分解淀粉產生葡萄糖的能力強,導致酒精發(fā)酵產生CO2速率更快。
(5)如果將B的絲氨酸變成亮氨酸,改變后的α-淀粉酶分子(B)不但保留B的功能,而且具更高的催化活性。以B基因序列為基礎,獲得B1基因的途徑有修飾 BB基因或合成 B1B1基因。
【答案】5'端;溶液Ⅰ;溶液Ⅱ;酵母菌;感受態(tài)酵母菌;在用該工程菌進行工業(yè)發(fā)酵時,應從菌體中分離、純化B蛋白;工程酵母菌分解淀粉產生葡萄糖的能力強,導致酒精發(fā)酵產生CO2速率更快;B;B1
【解答】
【點評】
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