心臟移植是挽救終末期心臟病患者生命唯一有效的手段，然而心臟移植過(guò)程中會(huì)發(fā)生缺血再灌注損傷（IRI），可能導(dǎo)致心臟壞死。研究發(fā)現(xiàn)，IRI通過(guò)促進(jìn)Caspase8等一系列凋亡基因的表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡壞死最終引起器官損傷。根據(jù)Caspase8基因合成的小干擾RNA（siRNA）可以使Caspase8基因沉默，有效抑制IRI所致的器官損傷。如圖1是利用豬的心肌細(xì)胞開(kāi)展siRNA作用研究的示意圖?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）圖1中步驟②構(gòu)建重組質(zhì)粒需要使用
限制酶、DNA連接酶
限制酶、DNA連接酶
等工具酶。與直接將siRNA導(dǎo)入豬的心肌細(xì)胞相比，通過(guò)重組質(zhì)粒將siRNA對(duì)應(yīng)的DNA序列導(dǎo)入心肌細(xì)胞，其優(yōu)點(diǎn)是 可持續(xù)產(chǎn)生siRNA，使靶基因長(zhǎng)時(shí)間沉默
可持續(xù)產(chǎn)生siRNA，使靶基因長(zhǎng)時(shí)間沉默
（答出一點(diǎn)）。
（2）siRNA對(duì)應(yīng)DNA序列在心肌細(xì)胞中表達(dá)產(chǎn)生的siRNA，與RISC組裝形成基因沉默復(fù)合物，通過(guò)抑制基因表達(dá)的 翻譯
翻譯
過(guò)程，使Caspase8基因沉默，從而降低IRI引起的細(xì)胞凋亡。
（3）研究人員根據(jù)Caspase8基因的堿基序列，設(shè)計(jì)了三種序列分別導(dǎo)入豬的心肌細(xì)胞，通過(guò)測(cè)定靶基因Caspase8的mRNA含量來(lái)確定最優(yōu)序列。測(cè)定mRNA含量時(shí)，需提取心肌細(xì)胞的總RNA，經(jīng)過(guò) 逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
過(guò)程得到cDNA，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增，測(cè)定PCR產(chǎn)物量，結(jié)果如圖2所示。據(jù)此判斷最優(yōu)序列是 序列2
序列2
。
（4）選用豬的心肌細(xì)胞做受體細(xì)胞是因?yàn)樨i在基因、解剖結(jié)構(gòu)、生理生化和免疫反應(yīng)等方面與人類極為相似。為了解決心臟移植供體短缺問(wèn)題，許多科學(xué)家正在研究用豬心臟代替人的心臟。你認(rèn)為將豬心臟移植到人體面臨的最大挑戰(zhàn)是免疫排斥反應(yīng)，這是因?yàn)槊庖呦到y(tǒng)會(huì)把外來(lái)器官當(dāng)作抗原（“非己”）成分進(jìn)行攻擊。請(qǐng)說(shuō)出一種解決這一問(wèn)題的思路：可以利用基因工程技術(shù)將免疫排斥有關(guān)豬的抗原基因敲除或轉(zhuǎn)入一些人類特有蛋白的基因，將豬細(xì)胞偽裝成人的細(xì)胞
可以利用基因工程技術(shù)將免疫排斥有關(guān)豬的抗原基因敲除或轉(zhuǎn)入一些人類特有蛋白的基因，將豬細(xì)胞偽裝成人的細(xì)胞
（利用基因工程的方法）。
