回答下列有關(guān)基因工程的問(wèn)題:
I.研究人員將某細(xì)菌的抗蟲(chóng)基因C轉(zhuǎn)入棉花細(xì)胞內(nèi),成功獲得了抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因棉花,在一定程度上減少了殺蟲(chóng)劑的使用,減少了環(huán)境污染,提高了作物的產(chǎn)量和質(zhì)量。
(1)提取某細(xì)菌總RNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄形成互補(bǔ)的DNA(cDNA),再利用PCR技術(shù)選擇性擴(kuò)增C基因的cDNA,PCR過(guò)程中DNA先后經(jīng)歷高溫變性→復(fù)性→延伸過(guò)程,故反應(yīng)體系中需加入
(逆轉(zhuǎn)錄酶)和耐高溫的DNA聚合酶(Taq酶)
(逆轉(zhuǎn)錄酶)和耐高溫的DNA聚合酶(Taq酶)
酶。
(2)常用農(nóng)桿菌與經(jīng) 消毒
消毒
后的外植體共培養(yǎng)一段時(shí)間完成轉(zhuǎn)化,需先將C基因的cDNA插入到T質(zhì)粒的T-DNA上并導(dǎo)入農(nóng)桿菌,有利于 吸引農(nóng)桿菌對(duì)受體細(xì)胞進(jìn)行侵染
吸引農(nóng)桿菌對(duì)受體細(xì)胞進(jìn)行侵染
。若要檢測(cè)目的基因是否反向插入,不能
不能
(填“能”或“不能”)根據(jù)帶標(biāo)記的目的基因單鏈作探針的核酸分子雜交結(jié)果判斷。
II.基因編輯技術(shù)(CRISPR/Cas9技術(shù))是一種對(duì)靶向基因進(jìn)行特定DNA修飾的技術(shù),其原理是由一個(gè)向?qū)NA(sgRNA)分子引導(dǎo)Cas9蛋白到一個(gè)特定的基因位點(diǎn)進(jìn)行切割(如圖)。請(qǐng)據(jù)圖回答:
(3)從CRISPR/Cas9系統(tǒng)作用示意圖看,能夠行使特異性識(shí)別DNA序列并切割特定位點(diǎn)功能的分子是 向?qū)NA(sgRNA)分子和Cas9蛋白
向?qū)NA(sgRNA)分子和Cas9蛋白
。一般來(lái)說(shuō),在使用基因編輯工具對(duì)不同DNA進(jìn)行編輯時(shí),應(yīng)使用Cas9和 不同
不同
(填“相同”或“不同”)的向?qū)NA進(jìn)行基因的相關(guān)編輯。
(4)CCR5基因是人體的正?;?,其編碼的細(xì)胞膜通道蛋白CCR5是HIV入侵輔助性T淋巴細(xì)胞的主要輔助受體之一??蒲腥藛T依據(jù) CCR5基因
CCR5基因
的部分序列設(shè)計(jì)sgRNA序列,導(dǎo)入骨髓造血干細(xì)胞中,構(gòu)建sgRNA-Cas9復(fù)合體,以實(shí)現(xiàn)對(duì)CCR5基因的定向切割,變異的CCR5蛋白無(wú)法裝配到細(xì)胞膜上,即可有效阻止HIV侵染新分化生成的 T淋巴細(xì)胞
T淋巴細(xì)胞
從而有效減緩病癥。