干燥綜合征(SS)是臨床常見的一種自身免疫病,其血清中存在多種抗體,其中以SSB抗體特異性最強,影響最顯著。科研人員為建立抗SSB抗體全自動定量檢測的磁微?;瘜W發(fā)光試劑,利用基因工程技術(shù)獲得重組SSB蛋白,流程如下,請分析回答:
(1)利用RNA通過①過程獲得cDNA需要
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
酶。通過PCR技術(shù)擴增SSB基因的前提是要有 一段已知的SSB基因的核苷酸序列
一段已知的SSB基因的核苷酸序列
,以便合成引物。為與PET41a質(zhì)粒連接,獲得的目的基因A兩端要含有 BamHⅠ和XhoⅠ
BamHⅠ和XhoⅠ
酶切位點。
(2)獲得含SSB基因的重組質(zhì)粒后,進行如下實驗切割原質(zhì)粒和重組質(zhì)粒,獲得片段大小如下表(1kb=1000堿基對)(注意:DNA片段大小與圖中所畫比例一致)
限制酶 |
EcoRⅠ |
BamHⅠ和XhoⅠ |
原質(zhì)粒 |
8.1kb |
2.7kb、5.4kb |
重組質(zhì)粒 |
3.4kb、5.0kb |
未做該處理 |
分析數(shù)據(jù),計算可得SSB基因的長度為
3kb
3kb
。與人基因組文庫中的SSB基因相比,通過①過程獲得的SSB基因結(jié)構(gòu)特點是
沒有啟動子和內(nèi)含子
沒有啟動子和內(nèi)含子
。
(3)②過程目的是將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到處于
感受態(tài)
感受態(tài)
的大腸桿菌內(nèi),并接種于添加
卡那霉素
卡那霉素
的培養(yǎng)基上,收集菌落進行鑒定,將陽性菌落進一步純化后將菌體破碎處理,篩選得到重組SSB蛋白。
(4)為檢測重組質(zhì)粒表達情況及重組蛋白與抗體結(jié)合能力,科研人員用含純化的重組SSB蛋白的弗氏佐劑連續(xù)三次免疫雌性小鼠,第三次免疫后第7天取小鼠血清并提取抗體并進行檢測,結(jié)果表明重組SSB蛋白具有與相應抗體高度結(jié)合的能力。對小鼠進行連續(xù)三次免疫的目的是
使小鼠體內(nèi)產(chǎn)生更多的記憶細胞和抗體
使小鼠體內(nèi)產(chǎn)生更多的記憶細胞和抗體
。