人乳鐵蛋白（hLF）廣泛分布于乳汁等外分泌液，初乳中含量較高，對細菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人員開展人乳鐵蛋白基因乳腺特異性表達載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染研究，主要流程如圖，圖中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相關(guān)限制酶切點，neor為新霉素抗性基因，BLG基因為β乳球蛋白基因，GFP基因為綠色熒光蛋白基因。請回答：
（1）過程①方法的基本原理是先以人乳腺細胞總RNA為模板通過逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA（互補DNA），再通過PCR技術(shù)擴增相應的DNA片段——hLF基因。但是過程①中，不能從人肌肉細胞中提取RNA用于RT-PCR，這是因為 hLF基因在人肌肉細胞中不轉(zhuǎn)錄hLF基因在人肌肉細胞中不轉(zhuǎn)錄，在RT-PCR過程中，加入的引物需在 5'5'端添加識別序列的限制酶是 SalⅠ和BamHⅠSalⅠ和BamHⅠ，以便于hLF基因插入pEB質(zhì)粒中。
（2）過程②中，hLF基因插入到BLG基因之后，利用后者的啟動子的目的是 使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細胞中表達使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細胞中表達。
（3）將轉(zhuǎn)染后的山羊乳腺上皮細胞先置于含新霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，能夠存活的細胞應該是導入了 pEB質(zhì)?；騪EBL質(zhì)粒pEB質(zhì)?；騪EBL質(zhì)粒的細胞，再利用熒光顯微鏡觀察山羊乳腺上皮細胞是否有 綠色熒光綠色熒光以篩選出轉(zhuǎn)染成功的細胞。
（4）科研過程中，可以用PCR技術(shù)檢測受體細胞中的染色體上DNA上是否 插入了hLF基因插入了hLF基因或檢測 hLF基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNAhLF基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA。可以用 抗原—抗體雜交抗原—抗體雜交技術(shù)，檢測hLF基因是否翻譯成人乳鐵蛋白。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】hLF基因在人肌肉細胞中不轉(zhuǎn)錄；5'；SalⅠ和BamHⅠ；使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細胞中表達；pEB質(zhì)?；騪EBL質(zhì)粒；綠色熒光；插入了hLF基因；hLF基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA；抗原—抗體雜交
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：7引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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