雙層平板法（如圖）是對(duì)噬菌體進(jìn)行檢測(cè)、計(jì)數(shù)的常用方法，該方法的操作流程為：倒底層平板→倒上層平板→培養(yǎng)→觀察→計(jì)數(shù)?；卮鹣铝袉?wèn)題：

（1）底層平板是含2%瓊脂的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，制備該培養(yǎng)基的一般步驟為：計(jì)算→稱量→溶化→

（調(diào)pH）滅菌

（調(diào)pH）滅菌

→倒平板；培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)需將培養(yǎng)基的pH調(diào)至

中性或微堿性

中性或微堿性

。某同學(xué)制作的底層平板凹凸不平，可能的原因是

溫度過(guò)低導(dǎo)致部分培養(yǎng)基已經(jīng)凝固

溫度過(guò)低導(dǎo)致部分培養(yǎng)基已經(jīng)凝固

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（2）倒上層平板時(shí)，先將含1%瓊脂的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基滅菌，再冷卻至45～48℃，然后加入細(xì)菌和待測(cè)噬菌體稀釋懸液的混合液，充分混勻后迅速倒在底層平板上，隨即旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿。將培養(yǎng)基冷卻至45～48℃最主要的原因是

避免高溫殺死細(xì)菌和噬菌體

避免高溫殺死細(xì)菌和噬菌體

，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿的目的是

使混合液分布均勻，確保平板平整

使混合液分布均勻，確保平板平整

。
（3）培養(yǎng)一段時(shí)間后，在上層平板上可以看見(jiàn)一些如圖所示的空斑即噬菌斑，出現(xiàn)空斑的原因是

噬菌體侵染細(xì)菌使其裂解死亡

噬菌體侵染細(xì)菌使其裂解死亡

。稀釋度足夠高時(shí)，一個(gè)噬菌斑來(lái)自原液中的一個(gè)噬菌體，根據(jù)噬菌斑數(shù)目和

稀釋倍數(shù)、使用稀釋懸液的體積

稀釋倍數(shù)、使用稀釋懸液的體積

就可推算出待測(cè)樣液中噬菌體的數(shù)量。統(tǒng)計(jì)的噬菌斑數(shù)往往比噬菌體的實(shí)際數(shù)目低，可能的原因是

一個(gè)噬菌斑可能由兩個(gè)或多個(gè)噬菌體侵染而成；兩個(gè)或多個(gè)噬菌斑重疊成一個(gè)

一個(gè)噬菌斑可能由兩個(gè)或多個(gè)噬菌體侵染而成；兩個(gè)或多個(gè)噬菌斑重疊成一個(gè)

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