人體內(nèi)的t-PA蛋白能高效降解由纖維蛋白凝聚成的血栓，是心梗和腦血栓的急救藥。

（1）研究人員采用PCR技術(shù)可以獲得大量t-PA基因，PCR的原理是

DNA半保留復(fù)制（DNA雙鏈復(fù)制）

DNA半保留復(fù)制（DNA雙鏈復(fù)制）

，此外，大量獲得t-PA基因的方法還有

（化學(xué)方法）人工合成、從基因文庫(kù)中獲取

（化學(xué)方法）人工合成、從基因文庫(kù)中獲取

（答出1種）。
（2）研究表明，為心梗患者注射大量t-PA會(huì)誘發(fā)顱內(nèi)出血，其原因在于t-PA與纖維蛋白結(jié)合的特異性不高，若將t-PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，能顯著降低出血副作用。據(jù)此，先對(duì)天然的t-PA基因進(jìn)行序列改造，然后再采取傳統(tǒng)的基因工程方法表達(dá)該改造后的基因，可制造出性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白。（注：如圖表示相關(guān)的目的基因、載體及限制酶。pCLY11為質(zhì)粒，新霉素為抗生素。）請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
①為獲得t-PA改良基因，要用到

基因編輯

基因編輯

技術(shù)來(lái)進(jìn)行堿基的替換。若獲得的t一PA改良基因如圖所示，那么質(zhì)粒pCLyll需要用限制酶

XmaⅠ

XmaⅠ

和

NheⅠ

NheⅠ

切開(kāi)，才能與t-PA改良基因高效連接。
②將連接好的DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌中對(duì)大腸桿菌接種培養(yǎng)，在培養(yǎng)基中除了加入水、碳源、氮源等營(yíng)養(yǎng)物之外，還應(yīng)加入

新霉素

新霉素

進(jìn)行選擇培養(yǎng)，以篩選成功導(dǎo)入pCLy11的細(xì)菌。配制好的培養(yǎng)基，通常采用

高壓蒸汽滅菌

高壓蒸汽滅菌

方法進(jìn)行滅菌。
③對(duì)培養(yǎng)得到的菌落進(jìn)行篩選，其中菌落為

白

白

色的即為含t-PA改良基因的重組DNA分子的大腸桿菌。