玉米螟和田間雜草嚴(yán)重影響玉米的生長發(fā)育，導(dǎo)致玉米產(chǎn)量和品質(zhì)下降，科研人員將crylAb、crylF（cry基因來源于蘇云金芽孢桿菌，其編碼的殺蟲蛋白能抑制玉米螟等玉米害蟲）和cp4epsps基因（cp4epsps基因來源于土壤根瘤農(nóng)桿菌，其編碼的蛋白質(zhì)對除草劑草甘膦不敏感）構(gòu)建在同一載體上，并利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化到玉米中，獲得具有抗蟲和耐除草劑性狀的轉(zhuǎn)基因玉米株系BFL4-1?；卮鹣铝袉栴}：
（1）為實現(xiàn)3種目的基因的擴(kuò)增，正常情況下需要制備

6

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種引物，引物的作用是

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

。在構(gòu)建基因表達(dá)載體時，通常需要在目的基因前后引入兩種限制酶的切割位點，該方法比用同一種酶進(jìn)行酶切的優(yōu)勢

防止目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化，防止目的基因反向連接等

防止目的基因和質(zhì)粒的自身環(huán)化，防止目的基因反向連接等

。（答出兩點）
（2）下表為檢測與鑒定含目的基因植株的4種方法。預(yù)測同一后代群體中，4種方法檢出的含目的基因植株的比例從小到大依次是

X₄、X₃、X₂、X₁

X₄、X₃、X₂、X₁

。

方法	檢測對象	檢測目標(biāo)	檢出的含目的基因 植株的比例
PCR擴(kuò)增	基因組DNA	目的基因	X1
分子雜交	總mRNA	目的基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物	X2
抗原—抗體雜交	總蛋白質(zhì)	目的基因編碼的蛋白質(zhì)	X3
個體鑒定	幼苗	抗除草劑和抗蟲幼苗	X4

（3）在植物體細(xì)胞雜交中為保證原生質(zhì)體在制備過程中的完整性，經(jīng)常需要將原生質(zhì)體放入適宜濃度的甘露醇中以維持原生質(zhì)體形態(tài)。為探究玉米原生質(zhì)體制備中甘露醇溶液的適宜濃度，進(jìn)行了如下實驗：
實驗材料及用具：玉米單細(xì)胞懸液、濃度為2mol/L的甘露醇溶液、細(xì)胞壁水解酶、蒸餾水、培養(yǎng)瓶、血細(xì)胞計數(shù)板、顯微鏡（具有測距功能）等。
請將實驗補充完整：

用蒸餾水將濃度為2mol/L的甘露醇溶液稀釋為等濃度梯度的溶液，用相應(yīng)數(shù)量的培養(yǎng)瓶編號，加入相同且適量的植物單細(xì)胞懸液，再加入相同的細(xì)胞壁水解酶，然后將等濃度梯度的甘露醇溶液分別加入各個培養(yǎng)瓶中

用蒸餾水將濃度為2mol/L的甘露醇溶液稀釋為等濃度梯度的溶液，用相應(yīng)數(shù)量的培養(yǎng)瓶編號，加入相同且適量的植物單細(xì)胞懸液，再加入相同的細(xì)胞壁水解酶，然后將等濃度梯度的甘露醇溶液分別加入各個培養(yǎng)瓶中

，
處理相同且適宜時間后，用血細(xì)胞計數(shù)板和顯微鏡對各個培養(yǎng)瓶中的原生質(zhì)體計數(shù)，并測量原生質(zhì)體的體積，并記錄。其中原生質(zhì)體數(shù)目最多，且原生質(zhì)體體積最接近植物細(xì)胞體積對應(yīng)的濃度即是最適宜的甘露醇溶液濃度。