新冠疫情后,病毒核酸檢測(cè)和疫苗接種在疫情防控中發(fā)揮了重要作用,回答下列問(wèn)題。
(1)新冠病毒是一種RNA病毒,檢測(cè)新冠病毒RNA(核酸檢測(cè))可以采取RT-PCR法,該過(guò)程中需要用到的酶有 逆轉(zhuǎn)錄酶、TaqDNA聚合酶逆轉(zhuǎn)錄酶、TaqDNA聚合酶。
(2)為了確保新冠病毒核酸檢測(cè)的準(zhǔn)確性,在設(shè)計(jì)PCR引物時(shí)必須依據(jù)新冠病毒RNA中的來(lái)進(jìn)行。據(jù)圖1分析,選擇的引物是 Ⅱ、ⅢⅡ、Ⅲ。其作用是 使TaqDNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸使TaqDNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸。
(3)下表是SARS-CoV-2核酸檢測(cè)時(shí)PCR儀參數(shù)設(shè)定要求;
步驟 | a、病毒cDNA合成 | b、預(yù)變性 | c、變性 | d、? |
溫度 | 50℃ | 95℃ | 95℃ | 60℃ |
時(shí)間 | 15min | 5min | 5s | 40s |
循環(huán) | 1 | 1 | 45 |
保證樣本中病毒RNA均能逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA
保證樣本中病毒RNA均能逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA
。②步驟d的主要包括PCR過(guò)程的
復(fù)性、延伸
復(fù)性、延伸
階段。(4)PCR的產(chǎn)物一般通過(guò)電泳來(lái)鑒定,結(jié)果如圖2所示。1號(hào)泳道為標(biāo)準(zhǔn)(Marker),2號(hào)泳道為陽(yáng)性對(duì)照(提純的目的基因片段),3號(hào)泳道為實(shí)驗(yàn)組。標(biāo)準(zhǔn)(Marker)的實(shí)質(zhì)為不同已知長(zhǎng)度的DNA片段混合物:3號(hào)泳道的若出現(xiàn)雜帶,原因一般有
模板受到污染;引物的特異性不強(qiáng);復(fù)性溫度偏低;Mg2+濃度過(guò)高等
模板受到污染;引物的特異性不強(qiáng);復(fù)性溫度偏低;Mg2+濃度過(guò)高等
(至少答出兩點(diǎn))。(5)某人同時(shí)進(jìn)行了新冠病毒核酸檢測(cè)和抗體檢測(cè)(檢測(cè)體內(nèi)是否有新冠病毒抗體),若核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性而抗體檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性,說(shuō)明
曾經(jīng)感染過(guò)新冠病毒但已康復(fù)
曾經(jīng)感染過(guò)新冠病毒但已康復(fù)
(答出1種情況即可);若核酸檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性而抗體檢測(cè)為陰性,說(shuō)明 己感染新冠病毒,還未康復(fù)
己感染新冠病毒,還未康復(fù)
。【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定.
【答案】逆轉(zhuǎn)錄酶、TaqDNA聚合酶;Ⅱ、Ⅲ;使TaqDNA聚合酶能夠從引物的3'端開(kāi)始連接脫氧核苷酸;保證樣本中病毒RNA均能逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA;復(fù)性、延伸;模板受到污染;引物的特異性不強(qiáng);復(fù)性溫度偏低;Mg2+濃度過(guò)高等;曾經(jīng)感染過(guò)新冠病毒但已康復(fù);己感染新冠病毒,還未康復(fù)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
聲明:本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有,未經(jīng)書(shū)面同意,不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:9引用:2難度:0.5
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1.數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù),其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是( ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布:2024/12/30 23:30:2組卷:6引用:2難度:0.6 -
2.PCR技術(shù)不僅可以擴(kuò)增目的基因,還可用于定點(diǎn)誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點(diǎn)突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進(jìn)行兩次PCR,其操作步驟為:
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)引物,得到兩個(gè)常規(guī)引物,分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物;
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計(jì)突變上游引物,突變位點(diǎn)位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進(jìn)行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物;
④用得到的下游大引物中和另一個(gè)常規(guī)上游引物進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增,得到突變目的基因序列?;卮鹣铝袉?wèn)題:
(1)PCR擴(kuò)增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān),DNA中G+C的含量越多,要求的變性溫度越高。其原因是
(2)在第一次PCR反應(yīng)中,形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過(guò)
(3)如果要利用微生物進(jìn)一步克隆PCR定點(diǎn)誘變產(chǎn)物,其步驟包括:發(fā)布:2024/12/30 23:0:2組卷:32引用:3難度:0.6 -
3.下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說(shuō)法錯(cuò)誤的是( ?。?/h2>
發(fā)布:2024/12/30 23:30:2組卷:3引用:3難度:0.7
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