B基因存在于水稻基因組中,其在體細胞和精子中正常表達,在卵細胞中不轉(zhuǎn)錄。為研究B基因表達對卵細胞的影響,設計并完成了如圖實驗來獲取能夠在卵細胞中表達B基因的轉(zhuǎn)基因植株。請回答下列問題:
注:Luc基因表達的熒光素酶能催化熒光素產(chǎn)生熒光
(1)圖中所示的基因表達載體需含有啟動子,它是RNA聚合酶RNA聚合酶 識別并結(jié)合的位點。
(2)可利用水稻體細胞或精子水稻體細胞或精子中的RNA構(gòu)建cDNA文庫,從中獲得B基因中編碼蛋白的序列。將該序列與Luc基因連接成融合基因(表達的蛋白質(zhì)能保留兩種蛋白質(zhì)各自的功能),然后構(gòu)建基因表達載體。與基因組文庫相比,cDNA文庫的基因數(shù)相對較少,原因是cDNA文庫是用某種生物發(fā)育的某個時期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的cDNA片段構(gòu)建而成的,因此只含有該種生物的一部分基因(已轉(zhuǎn)錄的基因);而基因組文庫含有該生物的全部基因cDNA文庫是用某種生物發(fā)育的某個時期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的cDNA片段構(gòu)建而成的,因此只含有該種生物的一部分基因(已轉(zhuǎn)錄的基因);而基因組文庫含有該生物的全部基因。
(3)基因工程操作的核心步驟是構(gòu)建基因表達載體構(gòu)建基因表達載體。
(4)要判斷T-DNA是否整合到水稻細胞染色體DNA上,可采用DNA分子雜交DNA分子雜交的方法進行檢測。
(5)可以通過檢測加入熒光素熒光素后該植株卵細胞中是否發(fā)出熒光,鑒定和篩選出能表達B基因的轉(zhuǎn)基因植株。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】RNA聚合酶;水稻體細胞或精子;cDNA文庫是用某種生物發(fā)育的某個時期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的cDNA片段構(gòu)建而成的,因此只含有該種生物的一部分基因(已轉(zhuǎn)錄的基因);而基因組文庫含有該生物的全部基因;構(gòu)建基因表達載體;DNA分子雜交;熒光素
【解答】
【點評】
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