反硝化細(xì)菌能在無(wú)氧環(huán)境中將硝酸鹽轉(zhuǎn)化為氮?dú)猓?

N

O

-

3

+10e^﹣+12H⁺→…→N₂O→N₂），在處理工業(yè)污水、治理水體富養(yǎng)化中具有重要作用?？蒲腥藛T想從一污水處理廠的活性污泥中篩選分離出耐高溫（42℃）的反硝化細(xì)菌（目的菌），用于提升溫度較高的工業(yè)污水的脫氮效率，具體流程如下：

注：BTB培養(yǎng)基初始pH=6.8，BTB是酸堿指示劑，酸性條件下為黃色，中性條件下為綠色，堿性條件為藍(lán)色。
（1）BTB培養(yǎng)基以

硝酸鹽

硝酸鹽

為唯一氮源，使用

高壓蒸汽滅菌

高壓蒸汽滅菌

法進(jìn)行滅菌。待平板凝固后，應(yīng)倒置放在超凈臺(tái)上，目的是

防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，避免培養(yǎng)基中的水分過(guò)快的揮發(fā)

防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，避免培養(yǎng)基中的水分過(guò)快的揮發(fā)

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（2）將污泥樣品梯度稀釋后，使用

涂布器

涂布器

（填工具）將樣液均勻涂布在BTB培養(yǎng)基上，放在

無(wú)氧、42℃

無(wú)氧、42℃

環(huán)境中培養(yǎng)2-3天后，挑選顯

藍(lán)

藍(lán)

色的單菌落在固體培養(yǎng)基上劃線分離，獲得純菌株。
（3）將純菌株接種在液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間，若在培養(yǎng)瓶頂部檢測(cè)到N₂O，即可鑒定為目的菌。不能依據(jù)培養(yǎng)液中硝酸鹽的濃度變低來(lái)鑒定目的菌，原因是

其他微生物也能利用硝酸鹽進(jìn)行代謝，硝酸鹽濃度同樣會(huì)降低

其他微生物也能利用硝酸鹽進(jìn)行代謝，硝酸鹽濃度同樣會(huì)降低

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（4）為計(jì)數(shù)微生物的數(shù)量，一位同學(xué)在4個(gè)平板培養(yǎng)基上分別接種稀釋倍數(shù)為10⁶的土壤樣液0.1mL，培養(yǎng)后菌落數(shù)分別為155、160、176、149，則每毫升原土壤樣液中上述微生物數(shù)量為

1.6×10⁹

1.6×10⁹

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