稻田生物固氮作用是稻田氮素循環(huán)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，某些藍細菌是自生固氮菌（獨立生活時能夠利用空氣中游離的氮分子作為氮源，并將氮分子轉(zhuǎn)化為氨，氨轉(zhuǎn)化為銨鹽后是植物良好的氮素營養(yǎng)）。藍細菌中B基因表達的B蛋白是一種有助于藍細菌高效吸收

NO

-

3

的載體蛋白，科學(xué)家利用基因工程和細胞工程等技術(shù)，嘗試將藍細菌的B基因?qū)胨炯毎?，以期獲得吸收

NO

-

3

能力較強的轉(zhuǎn)基因水稻，從而增加糧食產(chǎn)量。如圖1、2分別是農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒和藍細菌B基因的結(jié)構(gòu)模式圖?；卮鹣铝杏嘘P(guān)問題：

（1）為獲得可用于進一步研究的固氮藍細菌的菌株，從培養(yǎng)基功能的角度分析，可以使用

選擇

選擇

培養(yǎng)基從自然菌群中篩選，該培養(yǎng)基所需的營養(yǎng)物質(zhì)有無機碳源、

水、無機鹽

水、無機鹽

（寫兩種），但不需要添加

氮源

氮源

營養(yǎng)物質(zhì)，并在有光條件下培養(yǎng)。
（2）利用PCR技術(shù)以圖2中的DNA片段為模板擴增B基因時，需要的引物有

引物甲和引物丙

引物甲和引物丙

（填寫圖中引物代號），理由是

引物甲和引物丙能分別與B基因兩條鏈的一段脫氧核苷酸序列堿基互補配對，能擴增兩引物之間的B基因片段

引物甲和引物丙能分別與B基因兩條鏈的一段脫氧核苷酸序列堿基互補配對，能擴增兩引物之間的B基因片段

。
（3）在構(gòu)建含B基因的表達載體時，需要用限制酶

BclI和HindIII

BclI和HindIII

切割Ti質(zhì)粒和B基因，不選用其他限制酶的原因是

BamHI會破壞四環(huán)素抗性基因（和氨芐青霉素抗性基因），Sau3AI不能切割Ti質(zhì)粒

BamHI會破壞四環(huán)素抗性基因（和氨芐青霉素抗性基因），Sau3AI不能切割Ti質(zhì)粒

。
（4）為檢測B基因在轉(zhuǎn)基因水稻細胞中是否成功表達，可采用抗原—抗體雜交法在分子水平上檢測，還可以在個體水平上檢測，請寫出個體水平檢測的實驗思路：

將等量的生長狀態(tài)相同的普通水稻和轉(zhuǎn)基因水稻分別置于含相同濃度

NO

-

3

的完全培養(yǎng)液中，在適宜條件下培養(yǎng)一段時間，檢測并比較兩組培養(yǎng)液中

NO

-

3

的剩余量（或測定兩組水稻根系吸收

NO

-

3

的速率）

將等量的生長狀態(tài)相同的普通水稻和轉(zhuǎn)基因水稻分別置于含相同濃度

NO

-

3

的完全培養(yǎng)液中，在適宜條件下培養(yǎng)一段時間，檢測并比較兩組培養(yǎng)液中

NO

-

3

的剩余量（或測定兩組水稻根系吸收

NO

-

3

的速率）

。