圖示pIJ702是一種常用質(zhì)粒，其中tsr為硫鏈絲菌素（一種抗生素）抗性基因；mel為黑色素合成基因，其表達(dá)能使白色的鏈霉菌菌落變成黑色菌落；而限制酶SacⅠ、SphⅠ，BglⅠ在pIJ702上分別只有一處識(shí)別序列?；卮鹣铝袉?wèn)題。

表1
	pIJ702	pZHZ8
BglⅡ	5.7kb	6.7kb

表2
固體培養(yǎng)基中硫鏈絲菌素濃度（μg/mL）	0	1	2	5	10
不含質(zhì)粒的鏈霉菌生長(zhǎng)狀況	+++++	+++	+	-	-
“+”表示生長(zhǎng)；“-”表示不生長(zhǎng)。

（1）限制性?xún)?nèi)切核酸酶可以識(shí)別雙鏈DNA中特定核苷酸序列，并使每條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間

磷酸二酯鍵

磷酸二酯鍵

的斷裂，切割形成的末端有

黏性末端和平末端

黏性末端和平末端

兩種。
（2）以SacⅠ和SphⅠ切取的目的基因置換質(zhì)粒PIJ702上長(zhǎng)度為0.4kb的SacⅠ/sphⅠ片段，構(gòu)建重組質(zhì)粒pZHZ8．上述兩種質(zhì)粒的限制酶酶切片段長(zhǎng)度見(jiàn)表1．由此判斷目的基因的片段長(zhǎng)度為

1.4

1.4

kb,判定目的基因中含有一個(gè)BglⅡ切割位點(diǎn)的理由是

pIJ702上的原有BglⅡ位點(diǎn)被目的基因置換得到的環(huán)狀pZHZ8，仍能被BglⅡ切割成一條線段

pIJ702上的原有BglⅡ位點(diǎn)被目的基因置換得到的環(huán)狀pZHZ8，仍能被BglⅡ切割成一條線段

。
（3）導(dǎo)入目的基因時(shí)，首先用

Ca²⁺

Ca²⁺

處理鏈霉菌使其成為感受態(tài)細(xì)胞，再將重組質(zhì)粒pZHZ8溶于

緩沖液

緩沖液

中與感受態(tài)細(xì)胞混合，在一定的溫度下可以促進(jìn)鏈霉菌完成

轉(zhuǎn)化

轉(zhuǎn)化

過(guò)程。
（4）不含質(zhì)粒的鏈霉菌在含硫鏈絲菌素的固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)狀況如表2所示。若要篩選導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌細(xì)胞，所需硫鏈絲菌素濃度至少應(yīng)在

5

5

μg/mL以上，挑選成功導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌的具體方法是

根據(jù)導(dǎo)入pIJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌蓋落呈白色的特點(diǎn)，通過(guò)觀察菌落的顏色進(jìn)行挑選

根據(jù)導(dǎo)入pIJ702的鏈霉菌菌落呈黑色、導(dǎo)入pZHZ8的鏈霉菌蓋落呈白色的特點(diǎn)，通過(guò)觀察菌落的顏色進(jìn)行挑選

。